肠毒原性大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)基因探针的研制

经氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心分离纯化重组质粒pMMO 30 DNA 琼脂糖凝肢电泳回收的1．TDNA—HindII片段，用DNA缺口转译技术制备a-32p标记的LT基因探针，与标准ETFC(LT+)杂交为阳性，与非ETEC杂交则无同源性。从腹泻儿童和腹泻病猪粪便中分离的、经兔肠段结扎试验和免疫沉淀测定LT呈阳性的EFEC，与基因探针杂交呈现阳性：而且一个单菌落在硝酸纤维素滤膜上裂解的DNA印迹，与探针杂交可以进行放射自显影。如果采用不同的杂交条件，还可以鉴删测定ETEC的LT基因和霍乱弧菌的CT基因，一次可以进行几百个菌落的测定。结果表明，该探针可以用于实验室诊断和流行病学调查。