重组毕氏酵母中降解hIFNβ-HSA蛋白酶的鉴定及其活性控制 |
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作者姓名: | 宋一丹 窦文芳 许泓瑜 金坚 陆茂林 许正宏 |
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作者单位: | 1. 江南大学,医药学院制药工程实验室,无锡,214122 2. 江苏省微生物研究所,无锡,214122 3. 江南大学,医药学院制药工程实验室,无锡,214122;江苏省微生物研究所,无锡,214122 |
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基金项目: | 国家高技术研究发展计划(863计划)专题计划,教育部跨世纪优秀人才培养计划,上海市科学技术委员会生物医药重大科技攻关资助项目 |
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摘 要: | 研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K—IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ—HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和Western—Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×10^4的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出现了6.5×10^4的降解带,进一步结合HPLC分析证实该降解发生在融合蛋白hIFNβ—HSA的HSA区域。在此基础上,采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)活性电泳的方法,确定在融合蛋白hIFNβ-HSA表达的过程中,引起融合蛋白hIFNβ-HSA降解的蛋白酶为蛋白酶B(Proteinase B,PrB)。最后,确定了可以抑制融合蛋白hIFNβ-HSA降解的最佳的蛋白酶抑制剂EDTA,通过在诱导表达阶段添加不同浓度的蛋白酶抑制剂EDTA,使融合蛋白的表达量达到22.18mg/mL,与空白对照组相比增加了61%。
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关 键 词: | 毕赤酵母 蛋白酶 SDS—PAGE 高效液相色谱 人β干扰素-血清白融合蛋白 抑制剂 |
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