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| 鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定 | |
| 引用本文： | 王德解,苗林,陈宏,李彦英,陈惠鹏,方宏清.鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达、纯化与鉴定[J].生物工程学报,2007,23(1):61-66. |
| 作者姓名： | 王德解 苗林 陈宏 李彦英 陈惠鹏 方宏清 |
| 作者单位： | 1. 江西科技师范学院生命科学学院,南昌,330013;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 3. 西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100 |
| 基金项目： | 国家高技术研究与发展项目基金 |
| 摘 要： | 为了在毕赤酵母中表达鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,以RT-PCR法从SD鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,PEG1000介导转入毕赤酵母GS115细胞,在甲醇的诱导下,实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达。通过发酵条件的优化,使用BMGY(pH6·0)培养基,添加0·5%的酪蛋白水解物,于28℃,在起始OD600达10·0时,每隔12h补加0·5%的甲醇,重组酵母GS115-proCPB表达的产物量可达到最高(500mg/L),表达时间可达120h,表达的目的蛋白占总蛋白的94%以上。通过纯化条件的优化,采用两步疏水层析,可使目的蛋白的纯度达96%以上,蛋白得率达38%,重组proCPB活化后所得CPB的比活力可达110u/mg(CPB标准品为180u/mg)。相对分子量测定表明重组蛋白的分子量与理论值极相近,N-端氨基酸测序进一步表明proCPB基因在毕赤酵母中得到了正确的表达和翻译后加工修饰。 |
| 关 键 词： | 羧肽酶B 毕赤酵母 表达优化 蛋白纯化 |
| 文章编号： | 1000-3061(2007)01-0061-06 |
| 修稿时间： | 08 3 2006 12:00AM |
Expression, Purification and Characterization of Rat Procarboxypeptidase B in Pichia pastoris |
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| WANG De-Jie,MIAO Lin,CHEN Hong,LI Yan-Ying,CHEN Hui-Peng and FANG Hong-Qing.Expression, Purification and Characterization of Rat Procarboxypeptidase B in Pichia pastoris[J].Chinese Journal of Biotechnology,2007,23(1):61-66. | |
| Authors: | WANG De-Jie MIAO Lin CHEN Hong LI Yan-Ying CHEN Hui-Peng and FANG Hong-Qing |
| Institution: | College of Life Sciences, Jiangxi Sci-Tech Normal University, Nanchang 330013,China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;College of Animal Science and Technology, Northwest A&F University, Yangling, ShaanXi 712100, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China;Institute of Biotechnology, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100071, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | carboxypeptidase B Pichia pastoris expression optimization protein purification |
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