| 甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究 |
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| 引用本文： | 傅国平 崔中利 徐玮 吴旭平 李顺鹏. 甲基对硫磷水解酶的重组表达及其纯化和性质研究[J]. 微生物学报, 2004, 44(3): 356-360 |
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| 作者姓名： | 傅国平 崔中利 徐玮 吴旭平 李顺鹏 |
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| 作者单位： | 1. 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,210095;南京经济学院食品科学与工程系,南京,210003
2. 南京农业大学农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,210095 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 ( 3 0 3 0 0 0 0 5 )，江苏省自然科学基金 (BK2 0 0 10 71)，国家“863计划”( 2 0 0 1AA2 460 71，2 0 0 1AA2 14 12 1)，农业部跨越计划项目，国家科技攻关 ( 2 0 0 2BA5 16A0 1)~~ |
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| 摘 要： | 用PCR方法获得甲基对硫磷水解酶编码基因，构建了重组表达质粒pET29a_mpd,将其转化至Escherichia coli BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，得到C末端含有6个寡聚组氨酸的甲基对硫磷水解酶，用NiNTA亲和层析纯化得到具有活性的甲基对硫磷水解酶。测定了环境因素对酶活性的影响及酶动力学参数。甲基对硫磷水解酶水解甲基对硫磷时，最适pH86～8.8，最佳反应温度15℃；Mn2+、Zn2+、Cu2+可使酶活性增加15%～20%，Ca2+、Mg2+微弱地促进酶的作用，Ni2+对酶活性几乎无影响；1mmol/L EDTA·Na2+几乎不影响酶的活性，而10mmol/L EDTA·Na2+对甲基对硫磷水解酶有较强的抑制作用。甲基对硫磷水解酶水解乙基对硫磷时，最适pH86。25℃时，该酶对甲基对硫磷的米氏常数Km为（68.6 ± 5.1）μmol/L，kcat为（45 ± 6 ）S-1；对乙基对硫磷的米氏常数Km为（59.5 ± 6.0）μmol/L，kcat为（8 ± 1） S-1。Kcat/Km表明甲基对硫磷水解酶对甲基对硫磷的催化效率更高。
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| 关 键 词： | 甲基对硫磷水解酶，基因表达，NiNTA亲和层析，酶活性 |
| 文章编号： | 0001-6209(2004)03-0356-05 |
| 修稿时间： | 2003-07-01 |
Recombinant Expression of Methyl Parathion Hydrolase Gene and Its Purification and Characterization |
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| FU Guo-Ping , CUI Zhong-Li XU Wei WU Xu-Ping LI Shun-Peng. Recombinant Expression of Methyl Parathion Hydrolase Gene and Its Purification and Characterization[J]. Acta microbiologica Sinica, 2004, 44(3): 356-360 |
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| Authors: | FU Guo-Ping CUI Zhong-Li XU Wei WU Xu-Ping LI Shun-Peng |
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| Affiliation: | FU Guo-Ping 1,2 CUI Zhong-Li 1 XU Wei 1 WU Xu-Ping 1 LI Shun-Peng 1* |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Methyl parathion hydrolase Recombinant expression Purification Enyme kinetics |
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