| 利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库 |
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| 引用本文： | 武景阳,李朝翠,孔清华,毛炳宇. 利用修饰的随机引物构建非洲爪蟾酵母双杂交定向cDNA文库[J]. 动物学研究, 2008, 29(4): 368-372 |
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| 作者姓名： | 武景阳 李朝翠 孔清华 毛炳宇 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院昆明动物研究所,遗传资源与进化国家重点实验室,云南,昆明,650223;中国科学院研究生院,北京,100049
2. 中国科学院昆明动物研究所,遗传资源与进化国家重点实验室,云南,昆明,650223 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 描述了一种新的构建cDNA文库的方法,其中用来合成cDNA第一链的随机引物5'-端被加上碱基d(AC),在cDNA双链合成后所添加的连接头的末端含有碱基d(GTCG).在cDNA舣链3'-端,连接头连接上后会形成一个完整的Sall酶切位点d(GTCGAC),而在5'-端几乎不会形成Sall位点.在Sall酶切后利用形成的3'-粘性末端与5'-EcoRI粘性末端一起将cDNA双链定向导入线性化的质粒载体,再通过转化细菌获得cDNA文库.利用此方法构建了一个不同发育时期非洲爪蟾胚胎酵母双杂交cDNA文库.检测了文库中空载体的比例,插入片段大小和不同基因的表达水平几个指标,都符合预期,但是同时发现定位于mRNA的3'-端的插入片段比例比较低.这种倾向性符合文献报道,应该是实验系统的倾向性,不影响进一步的酵母双杂交实验.这些数据证明成功地构建了定向非洲爪蟾酵母双杂交cDNA文库.
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| 关 键 词： | 非洲爪蟾:酵母双杂交 随机引物 定向cDNA文库 |
| 收稿时间： | 2008-05-14 |
Construction and Analysis of A Directional Xenopus laevis Embryonic cDNA Library for Yeast Two-hybrid Using Modified Random Primers |
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| WU Jing-yang,LI Chao-cui,KONG Qing-hua,MAO Bing-yu. Construction and Analysis of A Directional Xenopus laevis Embryonic cDNA Library for Yeast Two-hybrid Using Modified Random Primers[J]. Zoological Research, 2008, 29(4): 368-372 |
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| Authors: | WU Jing-yang LI Chao-cui KONG Qing-hua MAO Bing-yu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Xenopus laevis Yeast two-hybrid Random primer Directional cDNA library |
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