泰山土壤宏基因组DNA中耐热b-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及性质 |
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引用本文: | 魏 萍,宋文刚,郝岗平.泰山土壤宏基因组DNA中耐热b-半乳糖苷酶基因的克隆、表达及性质[J].微生物学通报,2008,35(11):1686-1690. |
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作者姓名: | 魏 萍 宋文刚 郝岗平 |
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作者单位: | 泰山医学院基础医学部 泰安 271000;泰山医学院基础医学部 泰安 271000;泰山医学院基础医学部 泰安 271000 |
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基金项目: | 山东省医药卫生科技发展计划项目资助 (No. 2007HZ036) |
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摘 要: | 从泰山土壤宏基因组文库中发现可能的b-半乳糖苷酶基因pwtsA, 将其克隆到表达载体pET30a, 转化E. coli BL21(DE3)。工程菌在IPTG诱导下高效表达可溶性的重组蛋白PWTSA, 分子量为57 kD, 与预期大小一致。PWTSA能够水解ONPG产生o-硝基酚, 酶活力为13.6 U/mg, 确证了重组蛋白为b-半乳糖苷酶。PWTSA的最适反应温度在85°C ~95°C之间, 最适pH值为6.5, 对90°C左右的高温有很好的耐受力。在标准反应条件下, 酶作用于底物ONPG的米氏常数Km为0.83 mmol/L。
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关 键 词: | b-半乳糖苷酶 宏基因组 pwtsA 基因表达 |
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