在酵母体内用RNA聚合酶Ⅱ表达大肠杆菌tRNA~(Sec)基因 |
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引用本文: | 张妙华,刘建华,金由辛.在酵母体内用RNA聚合酶Ⅱ表达大肠杆菌tRNA~(Sec)基因[J].生物化学与生物物理学报,1995(5). |
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作者姓名: | 张妙华 刘建华 金由辛 |
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作者单位: | 中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室 |
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基金项目: | 国家“863”高科技基金,国家自然科学基金 |
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摘 要: | 我们将大肠杆菌的硒代半胱氨酸tRNA基因(SelC基因)连接到分泌型表达质粒PVT102U-αMFL中,并调整好阅读框架,使蛋白翻译的终止密码子位于SelC基因的下游.将该质粒转化酵母,通过SDS-PAGE分析,在SD液体培养基中检测出7~8kd的蛋白条带,这与理论值是相符合的。同时,我们抽提出酵母的总RNA用互补与该tRNATC茎环区的21-mer寡核苷酸,经5′标记后作为探讨进行Northernblot。结果有两条较强的条带和一条较弱的条带,较强条带中一条相当于790nts左右,另一条相当于370nts左古,根据组建的表达型质粒结构资料推测790nts左右的条带是由RNA聚合酶II转录的未被加工的前体;370nts左右的条带是5′端被加工而3′端未被加工的分子,较弱的条带则是相当于90nts左右的成熟tRNA分子。因此,我们认为RNA聚合酶II可以转录tRNA基因。由于实验用酵母的3′内切核酸酶含量较低,致使带长尾巴的tRNA前体3′端加工速度缓慢。
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关 键 词: | RNA聚合酶II RNA聚合酶III tRNA~(Sec)基因 转录 蛋白表达 |
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