| 低免疫原性的新型葡激酶ΔNMSak在大肠杆菌中的高效表达和分离纯化 |
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| 引用本文： | 宋钢,莫炜,宋后燕. 低免疫原性的新型葡激酶ΔNMSak在大肠杆菌中的高效表达和分离纯化[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2000, 0(6) |
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| 作者姓名： | 宋钢 莫炜 宋后燕 |
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| 作者单位： | 上海医科大学分子遗传学研究室!上海200032 |
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| 基金项目： | 86 3计划资助!项目 (10 3-13-0 1-0 2 ) |
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| 摘 要： | 为了降低野生型葡激酶 (wild- type staphylokinase,wt- Sak)的免疫原性 ,对已构建的葡激酶N端缺失突变体 (ΔNSak) c DNA进行改造 ,将其主要的抗原决定簇编码序列突变为丙氨酸密码子 .该突变体 (ΔNMSak) c DNA与原核表达载体 p LY- 4重组后 ,转化大肠杆菌 JF1 1 2 5.经温度诱导 ,ΔNMSak获得高效表达 ,重组蛋白占全菌总蛋白的 60 % ,以包涵体形式存在 .包涵体经洗涤 ,8mol/L尿素溶解 ,稀释复性 ,离子交换色谱一步分离至电泳纯 ,纯度达 95%以上 ,分子量与理论值相符 ,比活性 8.5× 1 0 4 HU/mg.经 ELISA法、发色底物法测定 ,ΔNMSak与 wt- Sak制备的兔抗wt- Sak抗血清的免疫反应性显著降低 ,经抗血清温育后 ,wt- Sak活性下降程度远高于 ΔNMSak.ΔNMSak、wt- Sak分别免疫豚鼠 ,以 ELISA法测定豚鼠血清中相应抗体的效价 ,ΔNMSak组的抗体效价明显低于 wt- Sak组 ,表明 ΔNMSak的免疫原性显著下降 .
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| 关 键 词： | 葡激酶 免疫原性 突变体 表达 纯化 |
Construction,Over-expression in E.coli and Purification of a Novel Variant of Staphylokinase with Reduced Immunogenicity |
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| SONG Gang,MO Wei,SONG Hou yan. Construction,Over-expression in E.coli and Purification of a Novel Variant of Staphylokinase with Reduced Immunogenicity[J]. Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology, 2000, 0(6) |
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| Authors: | SONG Gang MO Wei SONG Hou yan |
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| Affiliation: | SONG Gang,MO Wei,SONG Hou yan ** |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Staphylokinase Immunogenicity Mutant Expression Purification |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
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