GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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引用本文: | 杨蕴刘,恽定芳,关颖谦,彭惠林,陈剑民,何云生,焦瑞身.GL-7-ACA酰化酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达[J].生物工程学报,1991,7(2). |
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作者姓名: | 杨蕴刘 恽定芳 关颖谦 彭惠林 陈剑民 何云生 焦瑞身 |
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作者单位: | 中国科学院上海植物生理研究所,上海 |
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摘 要: | 本文报道了利用BamHⅠ酶解的载体pBR322 DNA与Sau3A部分酶解的假单胞菌Ps.130染色体DNA片段构建重组质粒,并用32P标记的寡核苷酸探针从3205个含有外源片段的重组质粒中检测得到7株阳性克隆株。进一步经125Ⅰ标记的抗体/抗原放射免疫反应、GL-7-ACA酰化酶活力测定以及酶反应产物的纸谱色层分析,由上述7株阳性株中鉴定出3株能在大肠杆菌中表达酰化酶活力的基因克隆株。对该3株菌的重组质粒——pMR 5、pMR 6和pMR-7-DNA的初步凝胶电泳分析表明,pMR 5和pMR 7质粒中插入片段的分子量为6.8kb,质粒pMR 6则带有5.7kb的外源片段。实验还比较了重组质粒pMR 5在8株不同的大肠杆菌宿主菌中,GL-7-ACA酰化酶的表达水平。
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关 键 词: | 头孢菌素酰化酶 基因克隆 7-氨基头孢烷酸 |
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