| 柞蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI基因克隆及表达特征分析 |
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| 引用本文： | 王磊,邱建烽,钱岑,朱保建,刘朝良.柞蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI基因克隆及表达特征分析[J].昆虫知识,2014,0(4):1003-1013. |
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| 作者姓名： | 王磊 邱建烽 钱岑 朱保建 刘朝良 |
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| 作者单位： | 王磊 (安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036)； 邱建烽 (安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036)； 钱岑 (安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036)； 朱保建 (安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036)； 刘朝良 (安徽农业大学生命科学学院,合肥,230036)； |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31301715)；安徽省自然科学基金项目(1308085QC60)；安徽农业大学引进和稳定人才项目(项目编号：YJ2013-8) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆柞蚕(Antheraea pernyi)Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(ApKTSPI)基因的cDNA序列并进行序列分析,研究ApKTSPI基因的组织表达分布及病原物免疫刺激后的表达模式,原核表达ApKTSPI。【方法】利用RACE-PCR方法扩增柞蚕ApKTSPI基因全长cDNA,生物信息学软件进行序列分析,利用实时定量PCR检测柞蚕ApKTSPI基因的组织分布及免疫刺激后的表达模式,利用pET-28a载体在大肠杆菌BL21中融合表达ApKTSPI。【结果】柞蚕ApKTSPI基因的cDNA全长568 bp,开放阅读框编码96个氨基酸,含一个Kazal结构域。ApKTSPI基因在柞蚕5龄幼虫脂肪体中特异性高表达,在核型多角体病毒、大肠杆菌和白僵菌免疫刺激后表达量都能上调,但上调的程度和时间都不同。ApKTSPI在大肠杆菌中成功诱导表达。【结论】获得了柞蚕ApKTSPI基因的cDNA全长,并研究了ApKTSPI基因的表达模式,为进一步研究其在柞蚕免疫中的功能及作用机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 柞蚕 Kazal 基因克隆 表达特征 |
Molecular cloning and expression profiles of a Kazal-type serine protease inhibitor gene in Antheraea pernyi |
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