| 人vWF-A1多肽的融合表达及生物学活性鉴定 |
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| 引用本文： | 祝怀平,王迎春,赵小娟,季顺东,白霞,阮长耿.人vWF-A1多肽的融合表达及生物学活性鉴定[J].中国生物化学与分子生物学报,2003,19(5):582-587. |
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| 作者姓名： | 祝怀平 王迎春 赵小娟 季顺东 白霞 阮长耿 |
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| 作者单位： | 1. 安徽省立医院
2. 苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,苏州,215006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No .3 0 0 70 3 2 2 )~~ |
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| 摘 要： | 血管性血友病因子 (vWF)通过与血小板膜糖蛋白结合介导血小板的粘附和聚集 ,在血栓形成过程中发挥重要作用 .通过阻断血小板与vWF的结合可抑制血栓形成 .应用RT PCR方法从人脐带内皮细胞中克隆vWF A1区基因并在原核细胞内进行表达 ,经过纯化、复性 ,获得重组蛋白(rvWF A1) .用流式细胞术检测rvWF A1与转染了糖蛋白Ib(GPⅠb)的CHO K1细胞和血小板GPⅠb的结合能力 ,血小板聚集仪测定rvWF A1对瑞斯托霉素 (ristocetin)诱导的血小板聚集作用的影响 .重组表达载体pET 2 0b(+ ) vWF A1在大肠杆菌BL2 1(DE3)plus中得到有效表达 ,表达的重组蛋白量占菌体总蛋白 30 % .次氮基三乙酸镍琼脂糖 (Ni NTAagarose)柱纯化后 ,其纯度为 95 % .经复性的rvWF A1蛋白具有良好的生物学活性 ,它可与转染了GPⅠb的CHO K1细胞和血小板结合 ,阳性率分别为 96 90 %与 78 6 0 % ,且可以抑制ristocetin诱导的血小板聚集 ,其抑制效应呈剂量依赖性 .IC50 的rvWF A1浓度为 0 5 6 μmol L ,当浓度为 1 4 μmol L时抑制率最高达 84 70 % .结果表明 ,在原核细胞中表达人rvWF A1区蛋白可抑制血浆中野生型vWF与血小板的结合 ,具有抗血栓形成的潜在应用前景
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| 关 键 词： | 血管性血友病因子A1 融合表达 生物学活性 血栓 血小板 |
| 收稿时间： | 2003-10-20 |
| 修稿时间： | 2002年9月29日 |
Expression of von Willebrand Factor-A1 Fragment in E.coli and Identification of Its Biological Activities |
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| ZHU Huai ping,WANG Ying chun ,ZHAO Xiao juan,JI Shun dong,BAI Xia,RUAN Chang geng.Expression of von Willebrand Factor-A1 Fragment in E.coli and Identification of Its Biological Activities[J].Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology,2003,19(5):582-587. |
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| Authors: | ZHU Huai ping WANG Ying chun ZHAO Xiao juan JI Shun dong BAI Xia RUAN Chang geng |
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| Institution: | (Jiangsu Institute of Hematology, The First Hospital Affiliated to Suzhou University, Suzhou 215006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | von Willebrand factor A1 recombinant expression biological activity thrombosis platelets |
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