| 斑马鱼外源基因acta1-AcGFP重组及其最佳注射浓度初探 |
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| 引用本文： | 潘鸿捷,刘红,蔡生力,张俊,叶斐菲,王豪杰. 斑马鱼外源基因acta1-AcGFP重组及其最佳注射浓度初探[J]. 生物技术通报, 2009, 0(6) |
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| 作者姓名： | 潘鸿捷 刘红 蔡生力 张俊 叶斐菲 王豪杰 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室,上海,201306 |
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| 基金项目： | 上海市教育委员会重点学科建设项目 |
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| 摘 要： | 肌动蛋白纤维(actin filament)又称微丝(microfilament,MF),由肌动蛋白(actin)组成,是骨骼肌的重要组成部分.通过PCR从斑马鱼基因组DNA中分离得到大小为2 019 bp的α肌动蛋白1(α-actin1)启动子所在区域片段.序列分析表明,该片段序列与NCBI公布的α-actin1基因5′侧翼区相应序列的相似性为98.7%,并且含有多个MEF2,E-box等对肌肉表达起调控作用的顺式元件以及在转录中起重要作用的TATA-box.将该启动子片段与绿色荧光蛋白基因(AcGFP)重组,构建肌动蛋白特异性表达载体.采用显微注射法,将线性化表达载体注入斑马鱼受精卵中,获得转绿色荧光蛋白基因斑马鱼,平均表达率最高为16.5%.并初步确定400 ng/μl为外源基因(acta1-AcGFP)的最佳注射浓度.通过观察发现,AcGFP基因主要在骨骼肌中表达,且表达量随仔鱼肌肉的发育呈增长趋势.证明了分离得到的α-actin1启动子所在区域片段具有有效的驱动功能,为进一步开展转基因观赏鱼的研究与开发提供了依据.
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| 关 键 词： | 肌动蛋白 启动子 转基因 绿色荧光蛋白基因 斑马鱼 |
Construction of Zebrafish acta1-AcGFP Recombinant and the Optimum Concentration for Micro-injection |
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| Pan Hongjie,Liu Hong,Cai Shengli,Zhang Jun,Ye Feifei,Wang Haojie. Construction of Zebrafish acta1-AcGFP Recombinant and the Optimum Concentration for Micro-injection[J]. Biotechnology Bulletin, 2009, 0(6) |
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| Authors: | Pan Hongjie Liu Hong Cai Shengli Zhang Jun Ye Feifei Wang Haojie |
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