基于实时荧光PCR定量检测肉制品猪源性成分方法的建立

为了建立肉制品中猪源性成分检测的PCR方法,以猪线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cyt b)为目的基因,设计猪特异性PCR引物;以猪、牛、羊、鸡及鸭DNA和不同稀释浓度猪DNA进行Real-time PCR反应,证明了该引物扩增具有物种特异性,检测低限可达5×10-5 ng/μL;设计内参基因β-actin通用引物,以猪源性成分含量0%~100%的混合肉样DNA为模板扩增,建立标准曲线,2-△△Ct值与猪源性成分含量有良好线性关系(R2=0.991 4);对猪源性成分含量0%~75%的混合肉样检测,回收率为99.85%~102.60%。应用建立的PCR方法检测了市售的6种品牌火腿肠,标识为清真食品的5种均未检测到猪源性成分,未标识清真食品的猪源性成分含量为12.70%。建立的实时荧光PCR检测方法操作简便、特异性强、所得数据可靠,为肉制品猪源性成分检测提供了新的手段。