解淀粉芽孢杆菌SYBC H47铁载体合成酶基因dhbA、dhbB、dhbC的克隆表达与序列分析

铁载体是微生物在缺铁环境中产生的小分子螯合物,利用CAS双平板法鉴定出已有菌株产铁载体,经鉴定所产铁载体为儿茶酚型。以解淀粉芽孢杆菌SYBC H47基因组DNA序列为模板,通过PCR克隆得到了铁载体产生途径中前体物质2,3-二羟基苯甲酸(DHB)合成所需酶的3个基因dhb A、dhb B、dhb C,结果表明三基因全长分别为786 bp、927 bp、1 197 bp,诱导表达,经SDS-PAGE电泳表明三蛋白大小分别为27.1 k D、34.3 k D、42.9 k D。用KMB培养基诱导表达三株重组菌株,表明三株重组菌株铁载体产量均有明显提高。经同源性比对和生物信息学分析发现,dhb A、dhb B、dhb C三基因分别编码2,3-二氢-2,3-二羟基苯甲酸脱氢酶、异分支酸酶、异分支酸合酶,dhb A、dhb C蛋白结构稳定,而dhb B蛋白结构则不是很稳定,其二级结构主要由α螺旋、β折叠、延伸链及无规卷曲构成但比例各不相同。以上结果为铁载体合成的研究提供了理论依据。