| 正义、反义MCP-1基因逆转录病毒载体重组质粒的构建和包装 |
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| 引用本文： | 张新萍,易著文,何小解,何庆南,朱敏,周钢.正义、反义MCP-1基因逆转录病毒载体重组质粒的构建和包装[J].生命科学研究,2004,8(3):237-241. |
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| 作者姓名： | 张新萍 易著文 何小解 何庆南 朱敏 周钢 |
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| 作者单位： | 1. 中南大学,湘雅二医院,儿科,小儿肾脏病研究室,中国,湖南,长沙,410011
2. 中南大学,湘雅医学院,分子生物学研究中心,中国,湖南,长沙,410078 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(39970776) |
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| 摘 要： | 为构建含单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechemoattractantprotein-1,MCP-1)基因的重组逆转录病毒pLXSN/MCP-1质粒.用RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA,将其与Pgem-TE连接,用限制性内切酶EcoRⅠ对pTE-MCP-1和逆转录病毒质粒pLXSN分别进行酶切.在T4连接酶的作用下,构建重组逆转录病毒质粒pLXSN/MCP-1.经BglⅡ,XhoⅠ酶切鉴定MCP-1在质粒中的方向,用脂质体介导的方法把重组质粒DNA转染进入包装细胞PA317中,经过G418筛选出抗性克隆.通过NIH3T3细胞测定病毒液的病毒滴度.结果证实经过RT-PCR技术从大鼠系膜细胞中扩增出MCP-1全长DNA与所需的大小一致.重组质粒经酶切分析与预期的结果一致.G418筛选出抗性克隆,能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒.NIH3T3细4胞测定病毒滴度为17×10cfu/mL.
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| 关 键 词： | 单核细胞趋化蛋白．1 逆转录病毒 基因转染 |
| 文章编号： | 1007-7847(2004)03-0237-05 |
| 修稿时间： | 2004年2月16日 |
Construction and Packaging of Recombinant Retroviral Vector Containing Sense- and Antisense- Rat Monocyte Chemoattractant Protein-1 Gene |
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| ZHANG Xin ping,YI Zhu wen,HE Xiao jie,HE Qin nan,ZHU Min,ZHOU Gang.Construction and Packaging of Recombinant Retroviral Vector Containing Sense- and Antisense- Rat Monocyte Chemoattractant Protein-1 Gene[J].Life Science Research,2004,8(3):237-241. |
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| Authors: | ZHANG Xin ping YI Zhu wen HE Xiao jie HE Qin nan ZHU Min ZHOU Gang |
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| Institution: | ZHANG Xin ping1,YI Zhu wen1,HE Xiao jie1,HE Qin nan1,ZHU Min2,ZHOU Gang2 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Monocyte chemoattractant protein 1(MCP 1) retrovirus vector gene transfer |
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