| 人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定 |
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| 引用本文： | 张娟,张艳丽,李海鑫,陈卫,张弢,王旻. 人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达与配体结合活性的鉴定[J]. 生物工程学报, 2008, 24(11): 1962-1967 |
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| 作者姓名： | 张娟 张艳丽 李海鑫 陈卫 张弢 王旻 |
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| 作者单位： | 中国药科大学生命科学与技术学院分子生物学教研室,南京,210009 |
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| 摘 要： | 血管内皮生长因子受体(VEGFR)是血管内皮生长因子的特异性受体,VEGFR-2在介导VEGF刺激内皮细胞增殖及血管通透性等生物学活性中起重要作用.在大肠杆菌中实现可溶性的人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区的表达,并鉴定其与配体结合的活性.采用重叠PCR的方法合成人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区基因,将该基因与高效表达载体pET-32a重组,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,表达产物依次经过CM阳离子交换树脂和镍柱亲和层析纯化.利用ELISA法和体外抑制VEGF刺激的人脐静脉内皮细胞增殖实验检测表达产物与配体结合的活性.SDS-PAGE显示,目的蛋白主要以可溶性Trx-KDR3融合蛋白表达于胞质,30℃时1 mmol/L IPTG诱导细菌5 h融合蛋白表达量约占胞质可溶性总蛋白的20%,经CM阳离子交换树脂和镍柱亲合层析纯化得到纯度为95%的产物,Western blotting鉴定是目的蛋白.ELISA和体外HUVEC细胞增殖实验显示,表达产物具有特异性结合hVEGF165的活性,且该作用呈一定的浓度依赖性.具有配体特异性结合活性的可溶性人血管内皮生长因子受体KDR胞外3区成功表达,为靶向血管抗肿瘤治疗和相关抗体的研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子 蛋白表达与纯化 |
| 收稿时间： | 2008-03-31 |
Expression and Function Identification of Extracellular Domain 3 of Human Vascular Endothelial Growth Factor Receptor KDR |
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| Juan Zhang,Yanli Zhang,Haixin Li,Wei Chen,Tao Zhang and Min Wang. Expression and Function Identification of Extracellular Domain 3 of Human Vascular Endothelial Growth Factor Receptor KDR[J]. Chinese journal of biotechnology, 2008, 24(11): 1962-1967 |
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| Authors: | Juan Zhang Yanli Zhang Haixin Li Wei Chen Tao Zhang Min Wang |
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| Affiliation: | Department of Molecular Biology, School of Life Science & Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China;Department of Molecular Biology, School of Life Science & Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China;Department of Molecular Biology, School of Life Science & Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China;Department of Molecular Biology, School of Life Science & Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China;Department of Molecular Biology, School of Life Science & Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China;Department of Molecular Biology, School of Life Science & Technology, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | KDR |
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