| 结核分枝杆菌H37Ra株HspX蛋白的表达条件优化、纯化和鉴定 |
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| 引用本文： | 魏婧,郑如明,李康生,李柏青,许涛,汪洪涛.结核分枝杆菌H37Ra株HspX蛋白的表达条件优化、纯化和鉴定[J].生命的化学,2023(2):286-295. |
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| 作者姓名： | 魏婧 郑如明 李康生 李柏青 许涛 汪洪涛 |
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| 作者单位： | 1. 蚌埠医学院检验医学院检验医学实验中心;2. 蚌埠医学院慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室;3. 蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室;4. 蚌埠医学院检验医学院临床检验诊断学教研室 |
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| 基金项目： | 安徽省自然科学基金项目(1908085MH252,2008085QH405)；;慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室开放课题基金项目(KLICD-2002-Z3)；;呼吸系病临床基础安徽省重点实验室开放课题基金项目(HX2022-Z02)； |
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| 摘 要： | 以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增获得HspX基因，通过DNA无缝克隆技术将其克隆至pET28a质粒中，构建重组表达质粒pET28a-HspX。将pET28a-HspX转化至大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3)，采用不同温度、IPTG浓度和时间诱导HspX蛋白表达。使用Ni-IDA亲和层析柱纯化目的HspX蛋白，透析去除咪唑，通过Western blot检测HspX抗原特异性。最终确定表达重组蛋白HspX的最佳诱导条件为：诱导温度37℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导时间8 h。结果表明，获得了高纯度和被特异性识别的可溶性Hsp X蛋白，为未来Hsp X蛋白用于结核病诊断试剂和疫苗奠定基础。
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| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 HspX 原核表达 纯化 条件优化 |
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