| 日本血吸虫SjOST48基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫保护效果分析 |
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| 引用本文： | 刘艳涛,洪炀,张旻,韩倩,曹晓丹,李莎,陆珂,李浩,傅志强,林矫矫. 日本血吸虫SjOST48基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫保护效果分析[J]. 生物工程学报, 2015, 31(4): 501-511 |
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| 作者姓名： | 刘艳涛 洪炀 张旻 韩倩 曹晓丹 李莎 陆珂 李浩 傅志强 林矫矫 |
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| 作者单位： | 1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241； 2 河南科技大学动物科技学院, 河南 洛阳 471023,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241,1 中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241；3 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (Nos. 31172315, 81271871) 资助。 |
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| 摘 要： | 为了鉴定日本血吸虫SJCHGC01743基因并评估其重组蛋白作为新的血吸虫病候选疫苗抗原的潜力,利用PCR技术扩增日本血吸虫SJCHGC01743基因,应用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段虫体的转录水平,以p ET-28a(+)为载体构建重组表达质粒并诱导其在大肠杆菌中表达。将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备免疫血清,利用Western blotting检测重组蛋白的免疫原性,应用间接免疫荧光技术对SJCHGC01743进行蛋白组织定位,利用间接ELISA方法检测小鼠血清中特异性抗体水平。将重组抗原免疫小鼠,评估其免疫保护效果。PCR扩增得到1 248 bp不含信号肽的c DNA序列,同源性分析结果显示,该基因为日本血吸虫寡糖转移酶OST48亚基,命名为Sj OST48。实时定量PCR分析显示Sj OST48在检测的童虫和成虫各个期别虫体中均有转录,其中在28 d虫体中的转录水平最高,在42 d雌虫中的转录量显著高于雄虫。构建的重组表达质粒p ET-28a(+)-Sj OST48成功在大肠杆菌中表达,重组蛋白r Sj OST48分子量约50 k Da。Western blotting分析表明r Sj OST48能被小鼠免疫血清识别,具有良好的免疫原性,间接免疫荧光实验表明Sj OST48蛋白主要分布于虫体体被,少量分布于实质。ELISA检测结果表明r Sj OST48能诱导产生较高的特异性Ig G、Ig G1和Ig G2a抗体。动物免疫保护实验结果表明Sj OST48能诱导小鼠产生32.62%(P0.05)的减虫率及57.61%(P0.01)的肝脏减卵率。本研究为深入探讨日本血吸虫Sj OST48基因的生物学功能及筛选新的血吸虫疫苗候选分子奠定了基础。
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| 关 键 词： | 日本血吸虫 SjOST48基因 表膜蛋白 免疫保护效果 |
| 收稿时间： | 2014-08-20 |
Cloning, expression of gene SjOST48 from Schistosoma japonicum and evaluation of the immunoprotective efficacy of rSjOST48 in mice |
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| Yantao Liu,Yang Hong,Min Zhang,Qian Han,Xiaodan Cao,Sha Li,Ke Lu,Hao Li,Zhiqiang Fu and Jiaojiao Lin. Cloning, expression of gene SjOST48 from Schistosoma japonicum and evaluation of the immunoprotective efficacy of rSjOST48 in mice[J]. Chinese journal of biotechnology, 2015, 31(4): 501-511 |
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| Authors: | Yantao Liu Yang Hong Min Zhang Qian Han Xiaodan Cao Sha Li Ke Lu Hao Li Zhiqiang Fu Jiaojiao Lin |
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| Affiliation: | 1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China; 2 College of Animal Science and Technology, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China,1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China and 1 Key Laboratory of Animal Parasitology, Ministry of Agriculture, Shanghai Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 200241, China; 3 Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses, Yangzhou 225009, Jiangsu, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Schistosoma japonicum SjOST48 gene tegument protein immunoprotective effect |
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