| 人乳头瘤病毒16型L2E7融合蛋白的优化表达、制备及其对肿瘤生长的抑制作用 |
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| 引用本文： | 姜云水,李剑波,高孟,任皎,金素凤,陈刚,吴洁,庄昉成,田厚文.人乳头瘤病毒16型L2E7融合蛋白的优化表达、制备及其对肿瘤生长的抑制作用[J].生物工程学报,2015,31(4):566-576. |
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| 作者姓名： | 姜云水 李剑波 高孟 任皎 金素凤 陈刚 吴洁 庄昉成 田厚文 |
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| 作者单位： | 1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,2 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所，北京 102206,1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,1 浙江省医学科学院病毒病研究所 浙江省医学生物工程疫苗研究开发重点实验室，浙江 杭州 310052,2 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所，北京 102206 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划 (863计划) (No. 2006AA02Z490)，浙江省科技计划 (No. 2012F10005) 资助。 |
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| 摘 要： | 为提高人乳头瘤病毒(HPV)16型治疗性融合蛋白疫苗HPV16 L2E7在大肠杆菌中的表达量,根据大肠杆菌偏爱密码子,对HPV16 l2e7基因进行密码子优化,优化后的基因分别插入到p GEX-5X-1、p QE30和p ET41a表达载体中,转化JM109、JM109(DE3)和BL21(DE3)表达菌,筛选出高表达菌株p ET41a-HPV16sl2e7/BL21(DE3),目的蛋白从占全菌蛋白的10%以下提高到约28%,优化接种量、IPTG浓度、诱导温度和诱导时间,获得最佳表达条件;通过15 L发酵罐发酵,SP Sepharose Fast Flow、Q Sepharose Fast Flow和Superdex 200 pg纯化及复性HPV16 L2E7融合蛋白,制备的融合蛋白纯度可达95%以上,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定证实,制备的HPV16 L2E7蛋白加Cp G佐剂对小鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用,有75%(6/8)的小鼠不成瘤,为后续的疫苗产业化奠定基础。
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| 关 键 词： | 人乳头瘤病毒16型 优化表达 发酵 纯化 宫颈癌 疫苗 |
| 收稿时间： | 2014/7/23 0:00:00 |
Optimized expression, preparation of human papillomavirus 16 L2E7 fusion protein and its inhibitory effect on tumor growth in mice |
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| Yunshui Jiang,Jianbo Li,Meng Gao,Jiao Ren,Sufeng Jin,Gang Chen,Jie Wu,Fangcheng Zhuang and Houwen Tian.Optimized expression, preparation of human papillomavirus 16 L2E7 fusion protein and its inhibitory effect on tumor growth in mice[J].Chinese Journal of Biotechnology,2015,31(4):566-576. |
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| Authors: | Yunshui Jiang Jianbo Li Meng Gao Jiao Ren Sufeng Jin Gang Chen Jie Wu Fangcheng Zhuang and Houwen Tian |
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| Institution: | 1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China,1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China,1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China,2 National Institute for Viral Disease Control and Prevention, China CDC, Bejing 102206, China,1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China,1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China,1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China,1 Medical & Biological Vaccine R&D Key Laboratory of Zhejiang Province, Institute of Virus Disease, Zhejiang Academy of Medical Sciences, Hangzhou 310052, Zhejiang, China and 2 National Institute for Viral Disease Control and Prevention, China CDC, Bejing 102206, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | human papillomavirus 16 optimized expression fermentation purification uterine cervica cancer vaccines |
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