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| 白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达 | |
| 引用本文： | 付建红,姚斌,杨浩萌,欧阳平凯,石玉瑚.白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因在大肠杆菌中的表达[J].生物加工过程,2008,6(3):68-73. |
| 作者姓名： | 付建红 姚斌 杨浩萌 欧阳平凯 石玉瑚 |
| 作者单位： | 1. 南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009;新疆农业科学院,微生物应用研究所,乌鲁木齐,830000 2. 中国农业科学院,饲料研究所,北京,100081 3. 南京工业大学,制药与生命科学学院,南京,210009 |
| 基金项目： | 新疆自然科学基金 , 新疆特殊环境微生物资源重点实验室资助项目 |
| 摘 要： | 构建了白地霉脂肪酶Ⅰ的基因工程菌,为进一步进行蛋白质工程改造和脂肪酶应用奠定了基础。从新疆昌吉市油脂化工厂含油冻土中分离得到1株低温脂肪酶产生菌-白地霉ch-3。该菌发酵上清液中的脂肪酶最适作用温度为35℃,在0℃仍可保持66%的相对酶活力。应用PCR技术从白地霉ch-3基因组DNA中克隆得到脂肪酶Ⅰ基因lip1,将该基因与原核表达质粒载体pET-22b（＋）连接,构建重组质粒pETl-ip1,转化E.coliBL21（DE3）,酶切鉴定,筛选得到重组菌。十二烷基磺酸钠-聚丙希酰胺（SDS-PAGE）显示重组脂肪酶Ⅰ的相对分子质量约为5.8×10^4,酶活为2.73 U/mL,表明lip1基因的表达产物具有正常的生物学活性。白地霉ch-3脂肪酶Ⅰ基因lip1能够在大肠杆菌中有效地表达。 |
| 关 键 词： | 大肠杆菌 白地霉ch-3 脂肪酶 基因克隆 |
| 文章编号： | 1672-3678(2008)03-0068-06 |
| 修稿时间： | 2007年9月29日 |
Expression of lipase I gene from Geotrichum candidum ch-3 in Escherichia coli |
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| FU Jian-hong,YAO Bin,YANG Hao-meng,OUYANG Ping-kai,SHI Yu-hu.Expression of lipase I gene from Geotrichum candidum ch-3 in Escherichia coli[J].Chinese Journal of Bioprocess Engineering,2008,6(3):68-73. | |
| Authors: | FU Jian-hong YAO Bin YANG Hao-meng OUYANG Ping-kai SHI Yu-hu |
| Institution: | FU Jian-hong, YAO Bin , YANG Hao-meng , OUYANG Ping-kai , SHI Yu-hu (1. College of Life Science and Pharmaceutical Engineering, Nanjing University of Technology, Nanjing 210009, China; 2. Applied Microbiology Research Institute, Xinjiang Academy of Agricultural Sciences, Urumqi 830000, China; 3. Institute of Feed, Academy of Chinese Agricultural Science, Beijing 100080, China) |
| Abstract: | A cold-adapted lipase-producing strain Geotrichum candidum ch-3 was isolated from frozen soil containing oil and fat. The optimal temperature of the lipase in the culture supernatant was 35 ℃. It retained 66 % activity at 0 ℃. Lipase Ⅰ gene lipl from G. candidum ch-3 was amplified by PCR and inserted into pET-22b （ ＋ ） to generate recombinant pET-lipl, pET-lipl was transformed into E. coli BL21 （DE3）. The Mr of the expression product was 5.8 ×10^4 by SDS-PAGE. The lipase activity was 2. 73 U/mL, which indicated the cloned DNA fragment encoded a lipase. Lipase gene lipl of G. candidum ch-3 was efficiently expressed in E. coli. |
| Keywords: | E coli Geotrichum candidum lipase gene cloning |
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