| 棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 常团结,陈蕾,路子显,陈宛新,孟昆,朱祯. 棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 动物学报, 2002, 48(6): 790-796 |
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| 作者姓名： | 常团结 陈蕾 路子显 陈宛新 孟昆 朱祯 |
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| 作者单位： | 中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京,100101 |
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| 基金项目： | 中国科学院特别支持项目，国家高技术研究发展计划(863计划)，中国博士后科学基金，国家转基因植物研究和产业化专项基金，STZ98-3-08，2001AA212041,2001AA222251，39989001、39980024,39880023，199-B-004，，，， |
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| 摘 要： | 根据昆虫类胰蛋白酶序列的保守性设计了一对引物，以棉铃虫（Helicoverpa armigera)幼虫中肠总RNA反转录出cDNA第一链作为模板，利用RT－PCR，分离出了一种棉铃虫类胰蛋白酶（HaT)基因的cDNA序列。分析表明该cDNA序列的开放阅读框为696bp，编码一个由231个氨基酸残基组成的多肽，推测的氨基酸序列具有His57,Asp102,Ser192组成的电荷中继网，决定胰蛋白酶底物专一性的Asp189，底物结合部位的Gly216和Gly226残基，及其它胰蛋白酶结构上的保守区域。氨基酸序列同源性比较表明：HaT同其它鳞翅目昆虫类胰蛋白酶有较高的同源性，同源性在44％－79％之间。为研究棉铃虫类胰蛋白酶基因（hat)编码产物的活性，将其插入原核表达载体pGEX4T-3和pET23b中，并在大肠杆菌中进行了诱导表达，结果表明，GST－HaT融合蛋白在大肠杆菌中进行了特异表达，非融合形式的表达产物HaT具有胰蛋白酶催化活性。
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| 关 键 词： | 棉铃虫 幼虫 中肠 类胰蛋白酶 基因表达 酶活性 基因克隆 |
CLONING OF A TRYPSIN-LIKE PROTEINASE GENE FROM THE MIDGUT OF COTTON BOLLWORM (HELICOVERPA ARMIGERA) LARVAE AND ITS EXPRESSION IN E. COLI |
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| CHANG Tuan Jie CHEN Lei LU Zi Xian CHEN Wan Xin Meng Kun ZHU Zhen. CLONING OF A TRYPSIN-LIKE PROTEINASE GENE FROM THE MIDGUT OF COTTON BOLLWORM (HELICOVERPA ARMIGERA) LARVAE AND ITS EXPRESSION IN E. COLI[J]. Acta Zoologica Sinica, 2002, 48(6): 790-796 |
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| Authors: | CHANG Tuan Jie CHEN Lei LU Zi Xian CHEN Wan Xin Meng Kun ZHU Zhen |
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| Affiliation: | CHANG Tuan Jie CHEN Lei LU Zi Xian CHEN Wan Xin Meng Kun ZHU Zhen ** |
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| Keywords: | Cotton bollworm ( Helicoverpa armigera ) Larvae Trypsin like proteinase Similarity Gene expression Proteinase activity |
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