| 牙鲆甲状腺激素受体TRaA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用 |
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| 引用本文： | 贾亮,施志仪,张俊玲.牙鲆甲状腺激素受体TRaA的原核表达和多克隆抗体的制备及应用[J].生物工程学报,2009,25(7):999-1006. |
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| 作者姓名： | 贾亮 施志仪 张俊玲 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学生物技术研究中心; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(No.30271017);;国家教育部博士项目基金(No.20040264001);;上海市教委重点科研项目(No.052252)资助~~ |
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| 摘 要： | 为研究牙鲆甲状腺激素受体TRαA在牙鲆变态发育过程中的调控作用,将TRαA基因克隆插入融合表达载体pET30a,并在大肠杆菌Escherichia coli DE3(BL21)中进行诱导表达。表达菌株经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导4h后,重组蛋白TRαA表达并形成包涵体。SDS-PAGE和Western blotting检测鉴定表达产物。包涵体经变性后在His-Bind树脂进行亲和层析纯化,柱上复性法对重组蛋白复性,获得纯度较高的目的蛋白,蛋白复性的效果良好。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔制备多克隆抗体。Dotblotting检测抗体效价达1:200000,检测证明抗体特异性良好。此外,通过染色质免疫沉淀技术鉴定了在活体细胞中多克隆抗体与TRαA的特异性结合,表明了甲状腺激素通过其受体在体内参与碱性磷酸酶(ALP)基因的转录调控。
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| 关 键 词： | 牙鲆 甲状腺激素受体TRαA 原核表达 抗体制备 染色质免疫沉淀 |
| 收稿时间： | 2009/11/19 0:00:00 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of TRaA in Japanese flounder Paralichthys olivaceus |
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| Liang Ji,Zhiyi Shi and Junling Zhang.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of TRaA in Japanese flounder Paralichthys olivaceus[J].Chinese Journal of Biotechnology,2009,25(7):999-1006. |
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| Authors: | Liang Ji Zhiyi Shi and Junling Zhang |
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| Institution: | Biotechnology Research Center, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Biotechnology Research Center, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Biotechnology Research Center, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Japanese flounder thyroid hormone receptor TRaA prokaryotic expression antibody preparation chromatin immunoprecipitation |
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