口蹄疫病毒A／AKT／58株基因组全长感染性cDNA克隆的体内拯救

构建了两种口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）基因组全长cDNA克隆DTA／FMDV和pCA／FMDV，利用体外转录和体内转录方法制备感染性病毒，并对其抗原性，乳鼠毒力（LD50）和病毒生长动力学等生物学特性进行了分析。为了鉴别野毒与重组病毒，利用融合PCR技术在两种全长cDNA基因组内分别引入了几个点突变（pTA／FMDV；T1029G，pCA／FMDV：A174G，A308G，T1029G）作为遗传标记。结果表明，两种重组病毒对3日龄乳鼠均表现致病性。但是由pTA／FMDV合成的感染性体外转录本RNA的毒力较弱（10^-6）；而与pCT7RNAP质粒共转染的pCA／FMDV体内拯救病毒的毒力较强（10^-7.5），并在BHK-21细胞上表现出与野毒相似的生长特性。这一结果表明，在FMDV的拯救过程中，以pCT7RNAP为基础的体内拯救系统相比体外转录方法更为简便、实用。该系统为利用反向遗传操作技术深入研究FMDV的分子致病机制及其准种特性等奠定了良好的基础。