| 人FGFR1的BacMam系统构建、表达、纯化与鉴定 |
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| 引用本文： | 武艺,罗志勇,陈艳霞,孟俊炜,方成.人FGFR1的BacMam系统构建、表达、纯化与鉴定[J].生物技术通报,2012(10). |
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| 作者姓名： | 武艺 罗志勇 陈艳霞 孟俊炜 方成 |
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| 作者单位： | 1. 同济大学生命科学与技术学院,上海200092;上海睿智化学研究有限公司,上海201203
2. 上海睿智化学研究有限公司,上海,201203 |
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| 摘 要： | 目前激酶类蛋白的表达大多由昆虫细胞表达系统实现,采用BacMam系统来表达受体型酪氨酸激酶人FGFR1,旨在获得更接近天然结构与功能的重组蛋白.首先,将pDEST20载体的多角体蛋白启动子替换成CMV enhancer启动子,获得BacMam表达载体pDEST20-CMVe.通过Gateway系统,将FGFR1具有酪氨酸激酶活性的区域克隆至改造后的载体中.利用昆虫细胞Sf9产生病毒,P2代病毒转导哺乳动物细胞FreeStyle 293-F进行表达,经亲和纯化后,成功获得了75 kD的融合蛋白.通过磷酸化底物的反应检测此FGFR1激酶的活性.结果表明,BacMam系统是一个良好的表达重组激酶FGFR1的平台,并且所表达的激酶活性高于昆虫细胞表达的激酶蛋白.
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| 关 键 词： | BacMam 载体构建 蛋白表达 激酶活性 |
Construction, Expression, Purification and Characterization of Human FGFR1 Using BacMam System |
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| Wu Yi
,
Luo Zhiyong
,
Chen Yanxia
,
Meng Junwei
,
Fang Cheng.Construction, Expression, Purification and Characterization of Human FGFR1 Using BacMam System[J].Biotechnology Bulletin,2012(10). |
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| Authors: | Wu Yi Luo Zhiyong Chen Yanxia Meng Junwei Fang Cheng |
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