| A型产气荚膜梭菌α毒素Thr-272基因定点突变与结构分析 |
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| 引用本文： | 樛跃,许崇波.A型产气荚膜梭菌α毒素Thr-272基因定点突变与结构分析[J].生物技术通报,2012(10). |
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| 作者姓名： | 樛跃 许崇波 |
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| 作者单位： | 大连大学医学院,大连,116622 |
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| 摘 要： | 利用定点突变技术,将A型产气荚膜梭菌α毒素( CPA)第272位苏氨酸(ACA)定点突变成脯氨酸(CCG),构建了含CPA突变基因表达质粒的重组菌株BL21( DE3)(pMCPA-T272P).经酶切鉴定和序列测定证实,构建的重组质粒pMCPAT272P含有CPA-Thr272Pro突变基因,且基因序列和阅读框架正确.重组菌株BL21( DE3)(pMCPA-T272P)表达产物经SDSPAGE分析,其表达量占菌体总蛋白相对含量的18.34％.应用ExPASy服务器上的SOPMA法对CPA和CPA-Thr272Pro突变体分子进行二级结构预测,同时模拟了其3D结构.结果显示,CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的二级结构主要是由α-螺旋和无规则卷曲组成,3D结构非常相似.CPA和CPA-Thr272Pro突变体蛋白的圆二色(CD)光谱分析发现二者的CD光谱有一些微小变化.磷脂酶C活性检测结果表明,CPA-Thr272Pro突变体蛋白失去了α毒素的磷脂酶C活性.免疫试验结果表明,用CPA-Thr272Pro突变体蛋白免疫的小鼠可以抵抗1MLD的A型产气荚膜梭菌标准株C57-1毒素攻击.
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| 关 键 词： | 产气荚膜梭菌 α毒素基因 定点突变 基因表达 圆二色光谱 |
Site-directed Mutagenesis and Structure Analysis of Clostridium perfringens Alpha-toxin Gene Thr-272 |
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| Jiu Yue
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Xu Chongbo.Site-directed Mutagenesis and Structure Analysis of Clostridium perfringens Alpha-toxin Gene Thr-272[J].Biotechnology Bulletin,2012(10). |
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| Authors: | Jiu Yue Xu Chongbo |
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