棉铃虫中肠类胰蛋白酶的部分纯化和性质测定及其对苏云金杆菌δ—内毒素的降解作用

将棉铃虫Helicoverpa armingera中肠液经SephadexG-75、DEAE-SephadexA-50阴离子交换和CM-SephadexC-50阳离子交换柱层析进行分离纯化，得到部分纯化的24.5kD蛋白，该蛋白可以水解胰蛋白酶的专性底物BApNA和TAME，不能水解胰凝乳蛋白酶的专性底物BTEE，蛋白酶抑制剂的抑制试验显示，TLCK、PMSF、STI及SBBI均可显著抑制该蛋白对BApNA的水解作用，而TPCK无抑制作用，由此推断，24.5kD蛋白是棉铃虫的类胰蛋白酶。以BApNA为底物，类胰蛋白酶的最适pH为10.5-11.0。SephadexG-75分离得到了4个洗脱峰，电泳结果显示，各洗脱峰均能使苏云金杆菌库斯塔克变种Bacillus thuringiensis var.kurstakiHD-1原毒素降解为60.5kD的活力片段，峰Ⅳ虽然不能水解BApNA和TAME，但仍可对原毒素进行降解，而类胰蛋白酶活力最高的峰Ⅱ已将60.5kD蛋白完全降解，当减少用量至1/3时，才出现60.5kD蛋白。因此，苏云金杆菌δ-内毒素在棉铃虫中肠内的降解有多种蛋白酶参与，类胰蛋白酶在其中起重要作用，CM-SephadexC-50进一步分离得到的类胰蛋白酶可对原毒进行降解，其降解作用受到TLCK、PMSF、STI及SBBI的显著抑制，不受TPCK的影响。