携多拷贝glaA的重组黑曲霉过量合成糖化酶的研究

以工业生产菌株黑曲霉CICIM F0410基因组DNA为模板，扩增出糖化酶glaA基因，测序并进行表达研究。GlaA基因的核苷酸序列长为2167 bp，包含4个内含子。氨基酸序列比对表明此黑曲霉糖化酶与其他曲霉属来源的糖化酶有很高的同源性。将glaA基因克隆到pBC-Hygro载体中，构建重组质粒pBC-Hygro-glaA并转化A. nigerF0410。携多拷贝glaA的转化子用150μg/mL潮霉素抗性筛选并通过荧光实时定量PCR鉴定。结果表明，在染色体整合2～3倍糖化酶基因对糖化酶的过量合成是适宜的，有助于提高糖化酶活力。对转化子进行摇瓶发酵研究，发酵终止时转化子GB0506的糖化酶活力比出发菌株F0410提高了17.5%。因此，增加黑曲霉染色体糖化酶基因的拷贝数可以显著提高糖化酶活力。