新基因人MOB cDNA的克隆与功能分析

人MOB基因被认为是在脑组织中高表达的5次跨膜而功能未知的膜蛋白.从胎儿和成人肾脏消减杂交cDNA文库中获得了一条新的表达序列标签（expressed sequence tag，EST）序列，该序列对应于功能未知的MOB基因.利用生物信息学分析工具和分子生物学技术，从胎儿肝脏中成功地克隆了人MOB基因cDNA序列，同时也获得了含有完整开放读码框的大鼠和鸡MOB的电子全长序列.人MOB基因定位于10q11.1～11.2之间，含有一个1 242 bp的开放阅读框，第415位开始的ATG可能是翻译起始位点.核酸序列相似性搜索发现，其他种属中存在与之高度相似的EST序列，如爪蟾（79%）、羊（87%）、猪（94%）、牛（93%）.蛋白质序列相似性搜索发现，人MOB与大鼠、小鼠和鸡MOB有97%、97%、91％的相似性，与其他一些不同种属来源的假想蛋白有45%～73%的相似性.不同物种之间MOB基因核酸和蛋白质序列的高度相似说明，MOB是进化上高度保守的蛋白质.保守结构域分析发现,人、小鼠、大鼠和鸡MOB结构域组成完全一致，N端均与不育α基序（sterile alpha motif，SAM）结构域显著匹配，随后出现匹配显著性稍差的几个结构域.核酸和蛋白质序列的保守性提示，除N端约70个氨基酸组成SAM结构域外，其余的保守氨基酸可能形成一个新的保守的MOB结构域.表达谱分析表明，人MOB基因在所有被检组织和细胞中都表达.亚细胞定位研究显示，人MOB广泛表达于细胞内，主要在细胞核.DNA含量测定结果表明，人MOB基因过表达并不影响HeLa细胞的细胞周期和凋亡.总之，人MOB蛋白是一个在多种组织和细胞中广泛表达、细胞内广泛分布、进化上十分保守的蛋白质，可能通过特定蛋白质之间的相互作用，参与多种发育过程的调节.其过表达不影响HeLa细胞的周期和凋亡.

Cloning and Function Analysis of A Novel Gene: Human MOB