| 粗枝云杉病程相关蛋白基因PaPR10的克隆及表达分析 |
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| 引用本文： | 梁 芳,刘利娟,李成松,赵炜栋,刘应高,杨春琳. 粗枝云杉病程相关蛋白基因PaPR10的克隆及表达分析[J]. 西北植物学报, 2022, 42(9): 1450-1459 |
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| 作者姓名： | 梁 芳 刘利娟 李成松 赵炜栋 刘应高 杨春琳 |
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| 作者单位： | (四川农业大学 林学院，成都 611130) |
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| 基金项目： | 四川省教育厅项目(09ZA068) |
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| 摘 要： | 为了探究粗枝云杉(Picea asperata)病程相关蛋白PR10的核糖核酸酶活性，该研究以粗枝云杉一年生针叶为材料，以响应云杉落针病菌(Lophodermium piceae)侵染而显著上调的一个PR10基因(PaPR10)序列为研究对象，设计特异性引物，采用RT PCR技术克隆获得PaPR10基因的cDNA序列全长，使用生物信息学软件预测该基因编码蛋白的序列特征，将该基因进行原核表达和纯化，利用底物法检测纯化蛋白的核糖核酸酶活性，为解析PR10基因的抗菌活性机理奠定基础。结果表明：(1)成功克隆到PaPR10基因(GenBank登录号为OM743228)的ORF长456 bp，编码151个氨基酸序列，相对分子量为16.52 kD，理论等电点为5.73。(2)PaPR10蛋白无信号肽、不含跨膜区、定位在细胞质中，具有典型的病程相关蛋白Bet_v_1家族保守结构域和一个富含甘氨酸环(P Loop)的保守结构域，但PaPR10蛋白的P Loop结构域存在一个碱基突变；PaPR10蛋白与北美云杉等多种裸子植物和部分苔藓植物的PR10蛋白相似性较高。(3)IPTG诱导下，PaPR10蛋白以可溶性蛋白和包涵体的形式并存，且以终浓度为0.8 mmol/L的IPTG在30 ℃下诱导10 h时表达量最佳，但纯化后的PaPR10可溶性蛋白没有核糖核酸酶活性。研究发现，PaPR10蛋白不具备核糖核酸酶活性。
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| 关 键 词： | 粗枝云杉；病程相关蛋白；克隆表达；生物信息学分析；核糖核酸酶活性 |
Cloning and Expression Analysis of a Pathogenesis Related Protein Gene PaPR10 in Picea asperata |
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| LIANG Fang,LIU Lijuan,LI Chengsong,ZHAO Weidong,LIU Yinggao,YANG Chunlin. Cloning and Expression Analysis of a Pathogenesis Related Protein Gene PaPR10 in Picea asperata[J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica, 2022, 42(9): 1450-1459 |
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| Authors: | LIANG Fang LIU Lijuan LI Chengsong ZHAO Weidong LIU Yinggao YANG Chunlin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Picea asperata pathogenesis related protein prokaryotic expression bioinformatics analysis RNase activity |
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