川续断提取皂甙促进骨质疏松模型中骨髓基质细胞成骨分化的作用机制研究

摘要 目的：探讨川续断提取皂甙（ASA）促进骨质疏松模型中骨髓基质细胞（rBMSCs）成骨分化的作用机制。方法：选取3月龄的雌性SD大鼠60只，随机分为卵巢切除组和假手术组，每组30只。采取卵巢切除法构建骨质疏松模型。建模成功后采用微型计算机断层扫描获得其松质骨微观结构的三维图像并进行分析。采用CCK-8法测定ASA对卵巢切除组rBMSCs增殖的影响。分析碱性磷酸酶（ALP）活性；荧光定量PCR检测成骨基因ALP、骨桥蛋白（OPN）、Runt相关转录因子2（RUNX2）的表达情况；蛋白免疫印迹试验检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）蛋白表达情况。结果：与假手术组比较，卵巢切除组骨小梁数量、骨小梁厚度和骨体积分数下降，但骨小梁分离度升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。第4天和第7天，ASA(10^-5 mol/L)组、ASA(10^-6 mol/L) 组、ASA(10^-7 mol/L) 组和ASA(10^-8 mol/L) 组rBMSC增殖均显著高于ASA(0学艺术mol/L)组，以ASA(10^-5 mol/L)最为显著；而ASA(10^-1 mol/L) 组、ASA(10^-2 mol/L) 组、ASA(10^-3 mol/L) 组和ASA(10^-4 mol/L) 组rBMSC增殖显著低于ASA(0 mol/L)组，以ASA(10^-4 mol/L)最为显著，差异均有统计学意义（P＜0.05）。第7天和第14天，ASA(10^-5 mol/L)组、ASA(10^-6 mol/L) 组、ASA(10 ^-7 mol/L) 组和ASA(10^-8 mol/L) 组ALP活性均显著高于ASA(0 mol/L)组，且第14天ALP活性高于第7天，差异均有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较，ASA组成骨相关基因ALP、OPN和RUNX2相对mRNA表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与ASA组比较，wortmannin组成骨相关基因ALP、OPN和RUNX2相对mRNA表达水平均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与对照组比较，ASA组PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；与ASA组比较，wortmannin组PI3K、p-AKT蛋白表达水平显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：ASA能促进骨质疏松模型rBMSCs增殖，增强ALP活性，增强ALP、OPN和RUNX2的表达，而PI3K通路抑制剂wortmannin降低了这些成骨作用，并降低了ASA诱导的PI3K、p-AKT水平，表明ASA通过PI3K/AKT信号通路促进骨质疏松模型rBMSCs成骨分化。

Study on the Mechanism of Asperosaponin in Promoting Osteogenic Differentiation of Rat Bone Marrow Stromal Cells in Osteoporosis Model