miR-939-5p对糖尿病视性网膜病变和视网膜微血管内皮细胞的调控作用

摘要 目的：探究miR-939-5p对糖尿病性视网膜病变和人视网膜微血管内皮细胞（HRMEC）的调控作用。方法：将miR-939-5p模拟物（miR-939-5p-mimic）或miR-939-5p抑制剂（miR-939-5p-inhibitor）转染到HRMEC中，并将细胞用高糖（HG组，25 mM）或低糖（LG组，5 mM）处理24 h。通过细胞计数试剂盒8（CCK-8）来检测细胞活力，EdU法检测细胞DNA的复制能力，Hoechst 33258染色检测细胞凋亡，使用双荧光素酶试剂盒E2920验证miR-939-5p与NOS2 3''-UTR之间的结合关系。对大鼠腹腔注射65 mg/kg的链脲佐菌素（STZ）诱导DR模型，通过RT-qPCR检测miR-939-5p水平，Western Blot检测诱导型一氧化氮合酶（NOS2）水平，苏木精伊红（HE）染色检查大鼠视网膜形态，免疫组织化学染色检测视网膜Claudin-5和Occludin的表达，伊文思蓝染色检测大鼠血视网膜屏障（BRB）通透性，ELISA法检测大鼠房水中白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平。结果：与LG组的HRMEC相比，HG组的miR-939-5p显著降低，而NOS2蛋白水平显著升高（P<0.05）。荧光素酶活性测定显示，与NC-mimic组相比，miR-939-5p-mimic与pGL3-NOS2-WT共转染组的荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。与HG+NC-mimic组相比，HG+miR-939-5p-mimic组的miR-939-5p水平和细胞活力显著升高，而NOS2蛋白水平和细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。与DR组相比，miR-939-5p-Agomir组大鼠视网膜组织病变减轻，Claudin-5和Occludin的表达水平明显升高，伊文思蓝浓度显著降低（P<0.05）；与DR组相比，miR-939-5p-Agomir组大鼠房水中IL-1β和TNF-α的水平均显著降低（P<0.05）。结论：在高糖培养的HRMEC中和DR大鼠视网膜中，miR-939-5p为低表达模式，NOS2为高表达模式。上调miR-939-5p通过靶向抑制NOS2对DR大鼠视网膜和HRMEC提供保护作用。

The Regulatory Effect of miR-939-5p on Diabetic Retinopathy and Retinal Microvascular Endothelial Cells