慢病毒介导的GFP转染对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、细胞表型及脑脊液诱导后分化能力的影响

摘要 目的：研究慢病毒（Lentivirus）介导的绿色荧光蛋白（Lentivirus-GFP）转染大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）的可行性及稳定性，以及对人脑脊液诱导转染后BMSCs（BMSCs-GFP）成神经分化能力的影响。方法：全骨髓贴壁法培养BMSCs，Lentivirus-GFP以5、10、30、50的感染复数（MOI）转染BMSCs，96h后倒置显微镜下观察GFP转染效率和表达情况，筛选最适MOI；流式细胞术检测细胞表型；CCK8法检测细胞活力。人脑脊液诱导BMSCs-GFP向神经细胞分化，蛋白印迹法检测神经细胞表面标记物MAP-2和Nestin表达。结果：全骨髓贴壁法分离培养的BMSCs生长旺盛。MOI值为5、10、30、50的转染效率分别为56.2%、87.3%、94.7%和95.1%，当MOI为30时，Lentivirus-GFP转染BMSCs效率较高，且对BMSCs生长状态无显著性影响。BMSCs-GFP表达CD29、CD90，较少表达CD45、CD54，符合干细胞特性。BMSCs-GFP增殖活性与未转染GFP基因的BMSCs相比，差异无统计学意义（P>0.05）。人脑脊液诱导BMSCs-GFP成神经细胞分化后表达神经元标记物MAP-2和Nestin。结论：Lentivirus-GFP能高效稳定转染大鼠BMSCs（最适MOI值为30），同时不影响其生物学特性，人脑脊液能诱导BMSCs-GFP成神经细胞分化。

Effects of Lentivirus-GFP Transfection System on Proliferation, Phenotype and Differentiation Ability of Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Induced by Cerebrospinal Fluid