Pamrevlumab（FG-3019）通过p38 MAPK信号通路调控人Tenon's囊成纤维细胞的增殖、移行和表型转化

摘要 目的：本研究旨在探究Pamrevlumab（FG-3019）对人Tenon''s囊成纤维细胞（HTFs）的增殖、移行和表型转化的影响。方法：应用组织块培养法进行HTFs的原代培养，通过波形蛋白(Vimentin)和细胞角蛋白（Cytokeratin）免疫荧光染色鉴定HTFs。首先将HTFs分为9组：Control组加入等量DMEM作为阴性对照组，其他组加入不同浓度的FG-3019，使其终浓度分别为10、20、50、100、200、300、400、500 μg/mL，通过MTT法检测FG-3019对HTFs的毒性。然后将HTFs分为4组：Control组（加入等量DMEM培养48 h）、TGF-β1组（10 ng/mL的TGF-β1培养48 h）、TGF-β1+FG-3019组（10 ng/mL的TGF-β1和100 μg/mL FG-3019培养48 h）、TGF-β1+FG-3019+anisomycin组（10 ng/mL的TGF-β1、100 μg/mL FG-3019和10 μg/mL anisomycin培养48 h）。通过MTT法和EdU法检测HTFs增殖，通过伤口愈合实验评价FG-3019对HTFs移行的影响通过qRT-PCR或Western blotting检测CTGF、p38 MAPK、p-p38 MAPK、α-SMA、FN和collagen I的表达变化。结果：免疫荧光染色显示，HTFs中波形蛋白阳性表达（98.17%），细胞角蛋白阴性表达（1.83%）。与Control组相比，200、300、400和500 μg/mL组的HTFs的细胞活力均显著降低（P<0.05）。与TGF-β1组相比，TGF-β1+FG-3019组的OD_490nm降低了19.64%，增殖指数降低了57.87%，伤口愈合率降低了56.46%（P<0.05）。与TGF-β1组相比，TGF-β1+FG-3019组的α-SMA、FN和collagen I蛋白相对表达量依次降低了70.78%、70.99%和70.04%，CTGF mRNA和蛋白相对表达量分别降低了75.83%和60.73%（P<0.05），p-p38 MAPK蛋白相对表达量降低了70.22%（P<0.05）。与TGF-β1+FG-3019组相比，TGF-β1+FG-3019+anisomycin组的增殖、移行、表型转化、CTGF mRNA和蛋白相对表达量、p-p38 MAPK蛋白相对表达量均显著增加（P<0.05）。结论：FG-3019部分通过抑制p38 MAPK信号通路来抑制TGF-β1诱导的HTFs增殖、移行和表型转化。

Pamrevlumab (FG-3019) Regulates the Proliferation, Migration and Phenotypic Transformation of Human Tenon's Cystic Fibroblasts through p38 MAPK Signal Pathway