| 敏捷食酸菌腈水解酶基因在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 管启旺,马江锋,贺爱永,姜岷,宫长斌. 敏捷食酸菌腈水解酶基因在大肠杆菌中的表达[J]. 生物技术通报, 2015, 0(1) |
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| 作者姓名： | 管启旺 马江锋 贺爱永 姜岷 宫长斌 |
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| 作者单位： | 南京工业大学生物与制药工程学院 材料与化学工程国家重点实验室,南京,211816 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，国家重点基础研究发展计划(“973”计划)，江苏高校优势学科建设工程项目 |
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| 摘 要： | 以含有敏捷食酸菌的腈水解酶基因的克隆质粒为模板,通过PCR扩增获得长度为1 080 bp的腈水解酶(Nitrilase)基因片段。使用表达质粒p ET-28-a构建表达载体,获得重组质粒p ET-Nit。对所表达的基因进行测序对比发现与Gen Bank所公布的基因序列比较,相似性99%,读码框出现2 bp的突变,但并未引起相应氨基酸突变,故不影响酶的表达与特性。将重组质粒转化到表达宿主Escherichia coli Rosetta(DE3)感受态中,使用诱导剂IPTG对菌株进行诱导表达,获取菌液进行SDS-PAGE分析,得知目的蛋白分子量约为41.28 k D,与预期所想的一致。酶活力分析表明,上清的比活力为3 U/mg。进一步对诱导条件进行优化,包括诱导温度,IPTG浓度,诱导时间等一系列条件。在最优条件下,扩大培养体积,比活力可达15 U/mg,活力提高了5倍左右。
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| 关 键 词： | 腈水解酶 敏捷食酸菌 大肠杆菌 克隆 |
Expression of Nitrilase Gene fromAcidovorax facilis inEscherichia coli |
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| Guan Qiwang,Ma Jiangfeng,He Aiyong,Jiang Min,Gong Changbin. Expression of Nitrilase Gene fromAcidovorax facilis inEscherichia coli[J]. Biotechnology Bulletin, 2015, 0(1) |
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| Authors: | Guan Qiwang Ma Jiangfeng He Aiyong Jiang Min Gong Changbin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | nitrilase Acidovorax facilis Escherichia coli clone |
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