砂藓总蛋白质提取方法的选取及双向电泳体系的建立 |
| |
引用本文: | 沙伟,李雯煜,张丽丽,张梅娟,马天意.砂藓总蛋白质提取方法的选取及双向电泳体系的建立[J].基因组学与应用生物学,2020,39(6):2659-2665. |
| |
作者姓名: | 沙伟 李雯煜 张丽丽 张梅娟 马天意 |
| |
作者单位: | 齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江重点实验室,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江重点实验室,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江重点实验室,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江重点实验室,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学生命科学与农林学院,齐齐哈尔,161006;齐齐哈尔大学,抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江重点实验室,齐齐哈尔,161006 |
| |
基金项目: | 国家自然科学基金;基本科研业务费项目 |
| |
摘 要: | 为进行砂藓(Racomitrium canescens)蛋白质组学的双向电泳工作,首要前提是获得质量较好的砂藓总蛋白质,并建立一套完整高效的适用于砂藓的双向电泳体系。本研究以砂藓为研究对象,比较了Tris-酚抽提法、TCA-丙酮法和试剂盒法3种蛋白质提取方法获得砂藓总蛋白质的浓度和完整性,并对砂藓中蛋白质双向电泳的运行条件进行了优化和比较。结果表明:在3种砂藓总蛋白质提取方法中,Tris-酚抽提法获得的砂藓总蛋白质浓度最高,SDS-PAGE电泳结果中条带清晰且较完整,双向电泳后获得的蛋白质点最多,是3种方法中提取砂藓蛋白质浓度最高完整性最好的方法;基于Tris-酚抽提法的基础上进一步对砂藓总蛋白质双向电泳体系进行优化,结果显示:利用pH值范围为pH 4~7的IPG胶条,蛋白质上样量为1 000μg的条件下,获得的砂藓蛋白质双向电泳图谱蛋白质点最多,图谱中可分辨的蛋白质点共(872±15)个,且低丰度蛋白质点清晰。本研究筛选出的方法获得了蛋白质点分布均匀、背景清晰、分辨率高、质量较高的双向电泳图像,建立了砂藓蛋白质组学研究体系的较好方法。本研究结果为砂藓蛋白质组学研究提供了良好基础。
|
关 键 词: | 砂藓(Racomitrium canescens) 蛋白质提取 蛋白质组学 双向电泳 |
本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录! |
|