家蝇细胞凋亡起始酶Caspase-1基因的克隆及在不同虫态的表达

为了研究Caspases家族在昆虫发育变态中的作用，通过RT-PCR扩增并结合RACE技术，克隆得到家蝇Musca domestica Caspase-1基因1条，命名为Mdom-Caspase-1（GenBank中cDNA序列号为EU854472， 氨基酸序列号为ACF71490）。该基因全长1 295 bp，阅读框序列870 bp，共编码289个氨基酸，理论分子量32.83 kDa，等电点8.67。 Mdom-Caspase-1蛋白有5个保守的半胱氨酸位点QACQG， 具有Caspase的典型特征； 整个分子呈现亲水性， 有8个区域共89个氨基酸为亲酯性， 蛋白质二级结构主要由11个α螺旋区、7个β-折叠区、17个β-转角区组成。昆虫间Caspase-1分子具有明显的保守性， Mdom-Caspase-1与黑腹果蝇Drosophila melanogaster、埃及伊蚊Aedes aegypti和致倦库蚊Culex quinquefasciatus的Caspase-1氨基酸序列相似性为65%~77%。RT-PCR半定量分析结果表明， Mdom-Caspase-1基因在家蝇各个虫态中均有表达， 但在卵期、3龄幼虫、预蛹、蛹和羽化5 d的雌虫中的表达量明显高于其他虫态。这些结果提示Caspase-1可能与昆虫发育变态关系密切， 为进一步研究昆虫Caspase-1功能、设计Caspase-1抑制剂提供了分子基础。

Cloning of the apoptosis initial enzyme Caspase-1 gene from the house fly,Musca domestica and its expression in different developmental stages