卷枝毛霉△^6—脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的高效表达

为获得产高γ—亚麻酸的酿酒酵母工程菌株，应用RT—PCR技术，从卷枝毛霉中扩增出△^6—脂肪酸脱氢酶基因，亚克隆到大肠杆菌和酿酒酵母的穿梭表达载体pYES2．0，在大肠杆菌中筛选到含有目的基因的重组质粒pYES412，用醋酸锂方法转化到酿酒酵母缺陷型菌株INVScl中，在SC—ura合成培养基中筛选到转化酵母，在合适的培养基及培养条件下，加入外源底物亚油酸，经半乳糖诱导后，收集菌体，通过气相色谱对转化酵母进行脂肪酸色谱分析，结果表明：γ—亚麻酸占总脂肪的50．07％。迄今为止，这是国内外△^6—脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母表达量最高的报道。