NirA1基因对球孢白僵菌生长、抗逆及毒力的影响

目的] 探究参与硝酸盐同化的一个特异转录因子NirA1对球孢白僵菌（Beauveria bassiana）生长、抗逆及毒力的影响。方法] 利用RT-PCR检测球孢白僵菌NirA1基因在不同培养基中的表达特征。通过构建敲除突变株ΔNirA1、超量表达OENirA1及回复互补菌株ComNirA1，解析NirA1在球孢白僵菌生长发育、逆境胁迫反应和致病昆虫中的功能。结果] NirA1基因在营养较贫瘠的CZB培养基中表达量高于丰富培养基PDB和SDB。敲除NirA1导致了菌株在人工培养基上的生长缓慢，对NaNO₂和Urea的利用效率降低。RT-PCR显示，ΔNirA1中硝酸盐转运蛋白基因NrtA的表达较野生型显著下调。在CZA、PDA和1/4 SDAY培养基中，其分生孢子产量分别较野生型降低了21.6%、16.2%和25.6%。逆境胁迫分析发现，在高温（32℃），高渗（1 mol/L NaCl）和H₂O₂处理后，ΔNirA1菌落生长抑制率较野生型分别降低29.0%、25.2%及49.0%；但在添加SDS和刚果红（CR）的处理中，突变体菌落的生长抑制率分别较野生型升高34.1%和96.2%。因此，缺失NirA后，菌株对SDS和CR更加敏感，但对高温、H₂O₂和NaCl的耐受性提高。以3龄的大蜡螟为试虫的毒力测定表明，敲除NirA1基因导致菌株的毒力提高，半致死时间较野生型提前17.4%。结论] NirA1在球孢白僵菌生长过程中参与了氮源的利用，并在球孢白僵菌的菌落生长、分生孢子生产、胁迫反应和致病宿主过程中发挥了重要作用。

Effects of NirA1 gene on growth, stress resistance and virulence of Beauveria bassiana