| 酵母双杂交系统筛选与RapGAP相互作用的蛋白质 |
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| 引用本文： | 苗小艳,孔繁斗,石敏,Bos JL,赵春艳. 酵母双杂交系统筛选与RapGAP相互作用的蛋白质[J]. 中国微生态学杂志, 2015, 0(6): 921-923 |
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| 作者姓名： | 苗小艳 孔繁斗 石敏 Bos JL 赵春艳 |
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| 作者单位： | 大连医科大学检验医学院，辽宁 大连 116044,大连医科大学附属第一医院妇产科，辽宁 大连 116011,大连医科大学检验医学院，辽宁 大连 116044,Department of Cell Biology, Utrecht University Medical Center, Utrecht, Netherlands,大连医科大学检验医学院，辽宁 大连 116044 |
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| 摘 要： | 目的筛选与Rap GAP相互作用的蛋白质,为进一步研究人源Rap1GAP介导的信号转导通路、揭示其与肿瘤的关系提供实验依据。方法选用与Rap1GAP同源的来自美丽线虫的Rap GAP作为饵蛋白,以来源于美丽线虫的c DNA文库作为靶蛋白,应用p PC97、p PC86组成的酵母双杂交系统筛选c DNA文库中与Rap GAP相互作用的蛋白质。结果通过营养缺陷平板(-LTH)筛选出63个拟似阳性菌落。经过Lac Z鉴定,19个菌落为阳性,其中7个为强阳性。提取来自19个酵母菌落中的重组DNA,经PCR扩增,12个菌落出现阳性结果。将该19个重组DNA分别电转化入DH5α细菌,涂板培养后,每板挑取4~10个克隆,通过Sal I和Not I双酶切鉴定进行阳性克隆筛选。将阳性克隆的重组DNA进行序列测定。测序结果与Gen Bank比较,其中4个克隆的DNA片段为Y39b6a基因片段、2个为Rap GAP、1个为苯丙氨酸-4-羟化酶、1个为细胞色素C氧化酶,还有1个DNA片段编码美丽线虫特有的小分子蛋白的基因片段,其余11个DNA片段不编码已知蛋白质。结论初步筛选出与Rap GAP相互作用的蛋白质,特别是其中有2个克隆为Rap GAP,提示Rap GAP可能以二聚体的方式存在。
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| 关 键 词： | RapGAP；酵母双杂交；美丽线虫 |
Screening for RapGAP interacting proteins by Yeast two-hybrid system |
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| MIAO Xiao-yan,KONG Fan-dou,SHI Min,Bos JL and ZHAO Chun-yan. Screening for RapGAP interacting proteins by Yeast two-hybrid system[J]. Chinese Journal of Microecology, 2015, 0(6): 921-923 |
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| Authors: | MIAO Xiao-yan KONG Fan-dou SHI Min Bos JL ZHAO Chun-yan |
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