香菇C91-3转录本Unigene1245基因的克隆表达 及其抗肿瘤活性研究

摘要：目的克隆香菇C91-3转录本中Unigene1245基因并进行生物信息学分析，研究其编码蛋白的抗肿瘤活性。方法提取香菇C91-3菌丝体总RNA，反转录合成cDNA，经RACE技术获得Unigene1245基因编码序列，通过NCBI对其进行生物信息学分析。设计特异性引物进行PCR扩增，将其克隆到载体pET-32a(+)上，将重组表达质粒热转化至E.coli Rosetta-gami(DE3)中，进行目的蛋白的诱导表达、纯化及复性，通过CCK-8法检测其抗肿瘤活性。结果香菇C91-3转录本Unigene1245基因为YjgF/YER057c/UK114家族成员，成功诱导表达其编码蛋白，CCK-8法结果显示该蛋白对人肝癌HepG2细胞的增殖具有一定抑制作用，且具有一定的时间及浓度依赖性。结论成功克隆并诱导表达Unigene1245基因，并鉴定其具有抑制HepG2细胞增殖的能力，为后续探究抗肿瘤机制奠定了基础。