绣球‘杜丽'AP3基因克隆与基因编辑载体构建 |
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引用本文: | 李 童,王月莹,赵惠恩.绣球‘杜丽'AP3基因克隆与基因编辑载体构建[J].广西植物,2024,44(2):257-266. |
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作者姓名: | 李 童 王月莹 赵惠恩 |
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作者单位: | 花卉种质创新与分子育种北京市重点实验室, 林木花卉遗传育种教育部重点实验室, 国家花卉工程
技术研究中心, 城乡生态环境北京实验室, 北京林业大学 园林学院, 北京 100083 |
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基金项目: | 国家林业和草原局引进国际先进林业科学技术项目(2015-4-15)。 |
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摘 要: | 绣球(Hydrangea macrophylla)是以花序为主要观赏部位的园林植物,多用作切花装饰和景观营造,在亚洲、美洲、欧洲广泛栽培。为探究AP3基因在绣球花萼形成过程中的功能,加快重瓣绣球新品种培育进程,该研究以绣球‘杜丽''为材料,克隆其MADS-box B类基因HmAP3,并结合生物信息学方法预测基因功能; 根据HmAP3序列信息,筛选出高特异性编辑靶点并构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,通过农杆菌转化法将载体整合到绣球基因组中。结果表明:(1)克隆到1段HmAP3基因的cDNA序列,其序列全长546 bp,共编码181个氨基酸,测序结果表明其氨基酸序列与参考序列一致性为100%,与拟南芥AtAP3相似度为58.8%。(2)不同属植物AP3氨基酸序列差异较大,在同属不同物种中,AP3蛋白主要结构较为保守,仅在少数基序上存在差异。(3)在HmAP3中共鉴定到2个高特异性靶点,并成功构建2个单靶点CRISPR/Cas9基因编辑载体。(4)该研究共获得5株基因组内含有Cas9序列的抗性芽,但其靶点均未突变,在抗性芽中没有检测到Cas9表达。该研究探讨了AP3基因在重瓣绣球育种中的价值,对绣球的CRISPR/Cas9基因编辑技术进行了初探,为绣球优良品种繁育工作奠定了基础。
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关 键 词: | 绣球 MADS-box家族 AP3 CRISPR/Cas9 载体构建 |
收稿时间: | 2022/5/20 0:00:00 |
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