| TAT-aFGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物活性测定 |
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| 引用本文： | 林健聪,张敏静,苏志坚,陈红霞,邱壮伟,娄国锋,项琪,黄亚东.TAT-aFGF融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其生物活性测定[J].中国生物工程杂志,2010,30(5):11-17. |
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| 作者姓名： | 林健聪 张敏静 苏志坚 陈红霞 邱壮伟 娄国锋 项琪 黄亚东 |
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| 作者单位： | 1.暨南大学生命科学技术学院医药生物技术研究开发中心 广州 510632
2.广东省生物工程药物重点实验室 广州 510632
3.基因工程药物国家工程研究中心 广州 510632 |
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| 基金项目： | "重大新药创制"国家科技重大专项，科技部中小型创新基金，国家自然科学基金，广东省教育部产学研结合项目，广东省博士启动项目 |
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| 摘 要： | 构建表达Tat与人酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor, aFGF）融合蛋白的重组质粒pET3c–Tat-aFGF14-154和pET3c-Tat-aFGF27-154，并转化大肠杆菌BL21（DE3）中。37℃，l mmol/L的IPTG诱导4 hrs后，获得分子量约为18 kDa的融合蛋白，表达量分别占菌体总蛋白的42%和24%。利用阳离子交换（CM-Sepharose FF）、肝素亲和层析（Heparin-Sepharose CL-6B）以及分子筛（Sephadex G-25）联用的方法可获得纯度大于95%的目的蛋白，得率分别为93和78 mg/L。Tat-aFGF14-154及其对照蛋白aFGF14-154对Balb/c 3T3细胞有明显促细胞增殖的作用，最佳作用浓度分别为1280 ng/ml和160 ng/ml。而Tat-aFGF27-154 及其对照蛋白aFGF27-154则几乎没有促细胞增殖活性。免疫荧光分析结果表明，Tat-aFGF14-154及Tat-aFGF27-154均能穿过PC12、Balbc/3T3、HaCaT和海马神经元细胞的细胞膜，并主要定位于细胞浆中。此外，四种重组蛋白均能降低Aβ25-35对大鼠海马神经元细胞的毒性，在剂量为1000 ng/ml时，Tat-aFGF14-154、Tat-aFGF27-154、aFGF14-154及aFGF27-154细胞存活率分别为90.66%、81.87%、85.71%和78.02%，而Aβ25-35模型组的存活率仅为56.87%。
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| 关 键 词： | 穿膜肽 人酸性成纤维细胞生长因子 融合蛋白 神经元 |
| 收稿时间： | 2010-02-22 |
| 修稿时间： | 2010-04-01 |
Expression, Purification and Bioassay of Tat-aFGF Fusion Protein in Escherichia coli |
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| LIN Jian-cong,ZHANG Min-jing,SU Zhi-jian,CHEN Hong-xia,QIU Zhuang-wei,Lou Guo-feng,Xiang Qi,HUANG Ya-dong.Expression, Purification and Bioassay of Tat-aFGF Fusion Protein in Escherichia coli[J].China Biotechnology,2010,30(5):11-17. |
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| Authors: | LIN Jian-cong ZHANG Min-jing SU Zhi-jian CHEN Hong-xia QIU Zhuang-wei Lou Guo-feng Xiang Qi HUANG Ya-dong |
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| Institution: | 1.Life Science and Techonology College of Jinan University，Biopharmaceutical Research &; Development Center, Guangzhou 510632,China
2.Guang Dong Provincial Key Laboratory of Bioengineering Medicine，Guangzhou 510632，China
3.National Engineering Research Center of Genetic Medicine，Guangzhou 510632，China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tat human acidic fibroblast growth factor fusion protein neurons |
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