| 竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究 |
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| 引用本文： | 陈爱美,陈仪本.竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究[J].微生物学报,2007,47(2). |
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| 作者姓名： | 陈爱美 陈仪本 |
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| 作者单位： | 1. 广东省微生物研究所,广州,510070;中国科学院南海海洋研究所,广州,510301;广东省菌种保藏与应用重点实验室,广州,510070
2. 广东省微生物研究所,广州,510070 |
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| 基金项目： | 广东省科技攻关计划;广东省科学院科研基金 |
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| 摘 要： | 建立了用于检测大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC25922的acrA基因mRNA表达水平的定量竞争性RT-PCR(QC-RT-PCR)体系。PCR合成目标片段的突变型片段(321bp)作为内标准模板(Internal standard,IS),与目标片段一致的片段(389bp)作为目标模板(Target standard,TS),优化两种模板共扩增体系;梯度稀释IS与等量大肠杆菌cDNA样本共扩增,扫描电泳条带,软件分析数据。结果表明,引物设计合适,以IS和TS为模板实现共扩增,产物(321bp和389bp)通过1.5%琼脂糖凝胶电泳有效分离;梯度稀释IS与cDNA共扩增产物出现亮度梯度电泳条带;获得一元回归曲线y=-0.345 0.097x(相关系数r=0.959,标准差s=0.05997)。该研究成功构建内标准模板,优化的共扩增PCR体系实现了对大肠杆菌ATCC25922中acrA基因mRNA表达水平的检测,具有简便、高效、敏感度高等优点。
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| 关 键 词： | 定量竞争性RT-PCR 外排系统 |
Quantitative competitive RT-PCR and quantitative detection of Escheriia coli acrA -mRNA |
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| CHEN Ai-mei,CHEN Yi-ben.Quantitative competitive RT-PCR and quantitative detection of Escheriia coli acrA -mRNA[J].Acta Microbiologica Sinica,2007,47(2). |
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| Authors: | CHEN Ai-mei CHEN Yi-ben |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | acrA |
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