| 嗜酸氧化亚铁硫杆菌启动子探针载体的构建 |
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| 引用本文： | 杨宇,黄芝英,刁梦雪,邱冠周.嗜酸氧化亚铁硫杆菌启动子探针载体的构建[J].生物技术,2008,18(5). |
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| 作者姓名： | 杨宇 黄芝英 刁梦雪 邱冠周 |
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| 作者单位： | 中南大学,资源加工与生物工程学院,湖南,长沙,410083 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)，国家自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的：为了研究嗜酸氧化亚铁硫杆菌（Acidithiobacillus ferrooxidans）启动子结构与功能。方法：以pSV-β-galactosidase质粒为骨架,通过定点突变的方法引入一个新的BstBⅠ单酶切位点,构建能在大肠杆菌（Escherichia coli）中正常复制的启动子探针载体。利用PCR的方法将A.ferrooxidans菌cycA2基因上游5＇段上游DNA片段克隆到探针载体β-半乳糖苷酶基因上游以替代其原有启动子（gpt启动子）,并将重组的质粒转化E.coliDH5α菌株。通过检测宿主细胞的β-半乳糖苷酶活性,来鉴定启动子片段,并分析了启动子探针质粒载体的功能及启动子的强度。结果：pSV-β-galactosidase质粒被正确突变,成功构建了启动子探针载体pSVB。来源于A. ferrooxidans菌的启动子片段可驱动β-半乳糖苷酶基因在E.coli细胞中表达,转化子酶活性约为gpt 启动子驱动下活性的70 %。结论：启动子探针载体（pSVB）可用于A. ferrooxidans菌或者其它原核生物启动子的分离及进一步的分析研究。酶活性分析结果表明,来源于A. ferrooxidans菌cycA2基因上游5＇段上游DNA片段具有显著启动子活性。
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| 关 键 词： | 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 启动子探针载体 β-半乳糖苷酶 定点突变 |
Construction of Promoter Probe Vector for Acidithiobacillus ferrooxidans |
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| YANG Yu,HUANG Zhi-ying,DIAO Meng-xue,QIU Guag-zhou.Construction of Promoter Probe Vector for Acidithiobacillus ferrooxidans[J].Biotechnology,2008,18(5). |
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| Authors: | YANG Yu HUANG Zhi-ying DIAO Meng-xue QIU Guag-zhou |
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