| 热稳定α-半乳糖苷酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究 |
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| 引用本文： | 李荷,游娟,顾取良,杨红.热稳定α-半乳糖苷酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究[J].中国生物工程杂志,2010,30(7). |
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| 作者姓名： | 李荷 游娟 顾取良 杨红 |
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| 作者单位： | 1. 广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系,广州,510006;中山大学生命科学学院,广州,504275
2. 广东药学院基础学院生物化学与分子生物学系,广州,510006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，广东省科技攻关项目，广东省自然科学基金博士启动基金 |
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| 摘 要： | 克隆前期筛得分枝犁头霉Absidia ramosa WL511的热稳定α-半乳糖苷酶cDNA基因aga(GenBank No.DQ234280),将aga基因插入表达载体pPICZαA并电转化整合到毕赤酵母P.pastoris GS115的染色体上。30℃、甲醇流加量0.5%(V/V)时,酵母发酵上清液中酶活达32U/ml。纯化后酶的比活力为137U/mg,SDS-PAGE显示单一条带,凝胶过滤和SDS-PAGE估算其分子量分别为348kDa和87kDa,该酶为四聚体结构,糖基化导致重组蛋白的分子量比原酶大6kDa。该酶等电点为5.2,最适反应温度73℃,最适pH6.8,60℃以下及pH5.5～9.0范围内活性稳定。75℃时保温2小时保留54%的酶活,85℃时酶活完全消失。以对硝基苯酚-α-D-半乳糖苷为底物,该酶Km值为0.42mmol/Lol/L;Vmax为413U/mg;kcat为64531/min。
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| 关 键 词： | 热稳定α-半乳糖苷酶基因 毕赤酵母 分泌表达 |
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