hsBAFF对小鼠脾脏B淋巴细胞增殖与免疫应答及胞内Ca2+水平的影响

目的：探讨大肠杆菌表达的人源可溶性B淋巴细胞激活因子hsBAFF对小鼠脾脏B淋巴细胞免疫反应及其对胞内游离Ca^2＋信号变化的影响。方法：选择20只健康ICR小鼠,雌雄各半,随机分成两组（n=10）：①对照组;②hsBAFF实验组。实验组小鼠腹腔注射含hsBAFF（0．1mg／kgbw）的PBS溶液,对照组注射同等剂量的PBS溶液．连续8d。用MTT法检测小鼠脾脏B淋巴细胞的增殖及其对LPS刺激的免疫反应,并用激光共聚焦显微镜分析脾脏B淋巴细胞胞内钙离子水平（[Ca^2＋]i）变化。结果：hsBAFF注射小鼠的脾脏B淋巴细胞增殖和对LPS刺激的免疫反应均明显高于对照组（P〈0．05）;hsBAFF注射组[Ca^2＋]i荧光强度维持在相对稳定的高水平上波动,平均荧光强度显著高于对照组（P〈0．01）,且荧光强度变化率小于对照组。结论：大肠杆菌表达的hsBAFF能促进B淋巴细胞的增殖和免疫应答,从而增强机体免疫功能。hsBAFF激活小鼠脾脏B淋巴细胞可能与[Ca^2＋]i升高有关。     

抗菌肽CM4与人可溶性B淋巴细胞因子hsBAFF在大肠杆菌中的融合表达

为进一步探讨抗菌肽CM4的原核表达及其生物学功能,本实验研究了抗菌肽CM4与人可溶性B淋巴细胞刺激因子hsBAFF的融合表达及抗菌肽CM4的生物学活性。运用PCR把B淋巴细胞因子hsBAFF和家蚕抗菌肽CM4进行基因融合,构建了融合表达载体pET28a (+)/CM4-hsBAFF,并在大肠杆菌中获得高可溶性表达的融合靶蛋白,且存在于超声破碎后的上清,经分子筛Sephadex G-75纯化后的重组融合蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定.SDS-PAGE分析表明：可以通过分子筛一步纯化得到融合蛋白,该重组融合蛋白的分子量约22.0 KDa。Western blot结果显示该重组蛋白能与鼠抗人hsBAFF的抗体发生特异性反应.运用基因工程的方法获得CM4-hsBAFF重组融合蛋白,并具有很好的抑菌生物学活性。