正常人及肝细胞癌患者肝脏及血浆中丙酮酸激酶同工酶免疫测定

 分别从人肝及鼠肝中高度纯化L型和M_1型丙酮酸激酶(Pyk),制备相应的免抗血清。从抗血清中纯化IgG并水解成F(ab')_2,进而还原成Fab',后者与辣根过氧物酶(HRP)交联成Fab'-HRP,再利用这两种复合物建立了各自的高灵敏夹心ELISA来免疫定量L及M_2型(与鼠M_1-Pyk有交叉免疫)Pyk,结果发现:正常人肝中95％的Pyk为L型,M_2-Pyk仅占5％,而肝细胞癌中L-Pyk降至正常肝的3.5％,M_2-Pyk却增至正常的14.6倍,以致M_2-Pyk占总量的95.5％。免疫组化研究进一步证实定量的结果,正常人肝L-Pyk染色呈强阳性。M_2-Pyk染色较弱,而肝细胞癌恰好相反,L-Pyk染色明显减退,而M_2-Pyk不仅癌组织染色很深,癌周组织也明显深于正常,而且愈近癌巢,染色愈深。测定血浆Pyk,发现正常人L-Pyk占89.9％,M-Pyk(以M_2计)仅占10.1％。肝细胞癌患者血浆L-Pyk略见降低,为正常值的79.6％,p值在0.02～0.05之间,但血浆M型Pyk明显升高至正常的4.59倍,占Pyk总量的39.6％,并证明主要来源于肝癌组织中的M_2,故M_2-Pyk有可能成为肝细胞癌诊断的新指标。     

改良DNA染色法对支原体检测的效果评估

目的 评估改良的DNA染色法检测支原体的效果。方法 使用无水乙醇为固定液和DAPI为荧光染料进行改良的DNA染色法,通过改变细胞接种浓度、细胞培养时间、接种支原体的浓度以及接种猪鼻支原体、口腔支原体和精氨酸支原体,观察支原体污染细胞进行DNA染色后的效果变化。结果 Vero细胞接种浓度在1.0×10⁵个/mL时,DNA染色效果最好;支原体在传代培养5 d后进行DNA染色效果更好;接种支原体污染的细胞上清,胞核外有较少的蓝色荧光,而接种支原体污染的细胞培养物的胞核外可见大量的蓝色荧光;猪鼻支原体的DNA染色效果比口腔支原体和精氨酸支原体的DNA染色效果好。结论 改变细胞接种浓度、细胞培养时间、支原体浓度以及种类,都能观察到不同的DNA染色结果,从而证明改良的DNA染色法也能用于支原体DNA染色检查。     

改良PAS染色法在急性肝损伤中的应用

目的：观察改良肝脏糖原PAS染色法,并观察肝脏糖原染色在急性肝损伤中的应用。方法：复制CCl4急性肝损伤模型,首次100％CCl43 mL／kg皮下注射,此后50％CCl4橄榄油溶液2 mL／kg每周2次共4次皮下注射,诱导大鼠急性肝损伤模型。计算大鼠肝体比;HE染色观察肝组织炎症病理;试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBil）、白蛋白（Alb）。肝脏常规PAS染色与改良PAS染色观察肝糖原染色。结果：与正常组相比,模型组ALT、AST活性与TBil含量明显升高（P＜0．05）,Alb含量明显降低（P＜0．05）;HE染色示,模型组肝小叶结构排列紊乱,肝细胞脂肪变、气球样变明显。常规PAS染色,正常组肝组织PAS染色阳性占肝脏面积为32．38％±5．50％;与正常组相比,模型组肝组织PAS阳性染色明显减少（P＜0．01）,占肝脏面积为8．60％±3．34％。改良PAS染色提示,正常组肝脏可见大量PAS阳性染色,占肝脏面积为75．50％±9．02％;与正常组相比,模型组肝组织PAS阳性染色明显减少（P＜0．01）,占肝脏面积为17．61％±3．53％。在空白对照组与模型肝组织中,肝糖原改良PAS染色阳性率明显高于常规PAS染色法（P＜0．01）。改良PAS染色肝糖原阳性染色面积更真实反映急性肝损伤程度。结论：改良肝脏糖原PAS染色法有助于急性肝损伤程度评估。     

六种杜鹃花属植物花粉活力测定方法的比较研究

选取睫毛杜鹃(Rhododendron ciliatum)、多鳞杜鹃(Rhododendron polylepis)、薄皮杜鹃(Rhdodenron taronense)、映山红(Rhododendron simsii)、马银花(Rhododendron ovatum)和比利时杜鹃(Rhododendron hybridum)为研究对象,通过蔗糖、H3BO3、CaCl2单因子及L25( 53)正交试验对它们进行花粉萌发试验研究,比较I2-Kl染色法、TTC染色法、联苯胺染色法、MTT染色法4种花粉活力测定方法的不同.结果表明:蔗糖、H3BO3、CaCl2及3因子交互效应对杜鹃花花粉萌发有显著影响.适宜的离体培养基配方依杜鹃花种类不同而不同,睫毛杜鹃为:蔗糖150 g/L +H3BO3 0 mg/L +CaCl2 50 mg/L;映山红为:蔗糖100 g/L +H3BO3 100 mg/L +CaCl20 mg/L;马银花为:蔗糖50 g/L+ H3BO3 200 mg/L +CaCl2 0 mg/L;比利时杜鹃为:蔗糖150 g/L+ H3BO3100 mg/L +CaCl2 0 mg/L.MTT染色法是简单快速测定杜鹃花花粉活力的最适染色法.     

车轮虫干银染色方法的改进

车轮虫（trichodinids）是一大类病害性寄生或共栖生的缘毛类纤毛虫,是鱼类中最为常见的寄生虫之一。虫体大多数分类性状在活体观察或非染色状态下不可直视,因此易于被忽视。干银染色法是目前车轮虫细胞学、遗传学、分类及形态学研究中常用的手段。经典的干银染色法作为车轮虫属间分类和种类鉴别的重要研究手段而沿用至今。国际间较流行的车轮虫种类鉴别的研究方法主要采用Foissner（1991）和Lom and Dykova（1992）对Klein（1958）的干银法修正版。     

SARS病毒巨细胞病毒合并感染真菌及其染色方法的应用比较

目的几种染色方法显示星形隐球菌和曲菌的比较。方法Grocott-Gomori六胺银改良法,Gomori氏嗜银法和PAS结果Grocott-Gomori氏六胺银改良法显示上述两种真菌效果最好,该法对真菌的显示颜色鲜艳,图像清晰,真菌的孢子和菌丝被染成深黑色,易与其它成份相区别;Gomori氏嗜银法对大量含有菌丝的组织有一定的染色效果,PAS法也能将上述两种真菌显示出来,但所着染成份较多,较难区别。结论Grocott-Gomori氏六胺银改良法是染真菌的最好方法。     

黑色素染色法在纤毛虫和鞭毛虫研究中的使用与改进

介绍并分析了前人在纤毛虫研究中使用过的黑色素染色法,得出作者自己的改进法及其复染法。报告了黑色素改进法的步骤及操作细节,并示出此法显示纤毛虫和鞭毛虫的效果。     

黑水虻幼虫血细胞类型的研究

黑水虻Hermetia illucens(L.)是一种重要的资源昆虫。本文旨在筛选出适合黑水虻血细胞观察的染色方法,明确黑水虻血细胞类型、数量及组成,为黑水虻血细胞免疫研究奠定基础。采用Giemsa和Giemsa-Wright's染色方法和血球计数板法,对黑水虻血细胞染色方法和血细胞数量及形态进行研究。结果表明,甲醇固定4 min,Giemsa-Wright's染液染色9 min、pH 7.2磷酸盐缓冲液分色10 min是黑水虻幼虫血细胞最佳染色方法;黑水虻幼虫血细胞包括原血细胞、浆血细胞、粒血细胞、类绛血细胞、珠血细胞5类;4龄黑水虻幼虫血细胞数量大约为2917个/μL,其中浆血细胞占53.20%±2.78%,粒血细胞占37.49%±3.96%,原血细胞占7.97%±1.51%,类绛血细胞占1.02%±0.24%,珠血细胞占0.62%±0.08%。Giemsa-Wright's染色法为黑水虻幼虫血细胞最佳染色方法,黑水虻幼虫血细胞可分为5类10种。     

同工酶分析技术及其在植物研究中的应用

同工酶几乎存在于所有生物的所有组织中,是生物化学和分子生态学的重要研究内容。本文阐明了同工酶分析技术的特点,及其在植物系统学、植物生理生态学研究中的应用,并着重阐述了同工酶分析技术在云杉研究中的应用。