乌头及其同属近缘种的SSR指纹图谱研究

乌头(Aconitum carmichaeli Debx.)为中国重要的药用植物,种质资源丰富,同属近缘种繁多。该研究采用SSR分子标记技术对采自17个种群的51份乌头样本和13个同属近缘种的65份样本进行扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,分析了乌头及其同属近缘种的遗传多样性、遗传分化和系统发育关系,筛选出稳定性好、多态性高的SSR引物构建乌头及其近缘种的指纹图谱。结果表明:(1)11对乌头微卫星引物均表现出高的多态性,共检测出109个复等位基因,平均每个位点9.91。(2)乌头在物种水平上遗传多样性丰富(A=3.090 9,I=0.889 7,h=0.540 2),种群间的遗传分化显著(Gst=0.277 4);乌头属14种植物表现出了较高的遗传多样性(A=9.909 1,I=1.526 2,h=0.690 5),物种间遗传分化显著(Fst=0.437),基因流微弱(Nm=0.451 8)。(3)聚类分析表明,同一种群的乌头样本首先聚在一起各自形成小支,17个小支聚为一支;13个乌头近缘种材料中,相同物种的样本分别聚为一支;乌头属14个物种聚为5个大支,与形态分类结果一致。(4)利用基因型丰富、多态性高的6对SSR引物(Tchin03、Tchin04Tchin20、Tchin26、Tchin29、Tchin32)可有效区分14种乌头属植物,并以此建立了乌头种质资源和近缘种的DNA指纹图谱。该研究为乌头的种质资源鉴定及混伪品鉴定提供了重要的技术支撑。     

中坝鹅掌叶附子中的生物碱成分

从中坝鹅掌叶附子(Aconitum carmichaeli Debx．)的块根中分离得到6个二萜生物碱,根据波谱方法分别鉴定为：songoramine(1)、次乌头碱(hypaconitine,2)、karakanine(3)、宋果灵(songorine,4)、尼奥宁(neoline,5)、附子灵(fuzline,6)。其中化合物3为首次从该植物的块根中分离鉴定。     

黄附子中糖复合物的初步分析

生药中糖复合物研究是２１世纪生物科学热点之一。本文首次报道了附子中糖复合物的研究结果。我们采用饱和硫酸铵沉淀、乙醇分级沉淀及ＤＥＡＢ－Ｃ３２层析方法,从黄附子中分离出三种组分,通过鉴定发现：组分Ｉ主要为糖蛋白,组分Ⅱ主要含酸性多糖,组分Ⅲ可能是淀粉。此研究结果为全面深入地研究和开发附子提供了参考依据。     

附子多糖FI的分离纯化及部分理化性质研究

白附片经热水抽提、Sevag法脱蛋白、乙醇沉淀、DEAE- C32柱层析分离 ,再通过 Sephadex G- 2 0 0柱层析进一步纯化 ,得到一种纯白色粉末状多糖 ,糖含量为 97% ,平均分子量为 2 .6× 10 5,熔点为 2 70℃。经完全酸水解、薄层层析、红外光谱分析 ,证明为葡聚糖。     

四川江油附子生物碱和新的强心成分研究

从四川江油附子(Aconitum carmichaeli Debx.)的生附片中分离出海帕乌头碱(hypeconitine)、乌头碱(aconitine)、美沙乌头碱(mesaconitine)、尼奥灵(neoline)、卡拉可林(karakoline)、北乌碱(beiwutine)、附子灵(fuziline)、江油乌头碱(jiangyouaconitine)、去氧乌头碱(deoxyaconitine)、附子亭(fuzitine)、新江油乌头碱(neojiangyouaconitine)、宋果灵盐酸盐(songoring.HCl)和尿嘧啶(uracil)。其中新江油乌头碱和附子亭为新化合物;去氧乌头碱、北乌碱、宋果灵盐酸盐和尿嘧啶为本植物中首次发现。尿嘧啶对蟾蜍离体心脏具有明显的加强心肌收缩作用,作用随剂量增加与时间延长而逐渐增强,且不影响心率,认为是一种新型的强心成分,为首次发现。本文对附子的强心、止痛及抗炎的活性及其开发新药加以讨论。     

乌头根腐病病原菌的分离与鉴定

【背景】四川江油地区栽培乌头极易发生根腐病,植株染病后枯萎死亡,最终影响药材产量。因发病因素和致病菌多样,乌头根腐病的防治向来困难。【目的】鉴定四川江油地区栽培乌头根腐病病原菌,为病害诊断和防治提供理论基础。【方法】采用组织分离法进行病原菌分离;按照Koch’s法则对分离的病菌进行致病性验证;通过形态学观察和真菌r DNA-ITS序列分析,鉴定病原菌种类。【结果】从具有根腐病症状的乌头根部分离得到47株真菌,其中菌株GF3-3、GF3-6和GF6-1是乌头根腐病的致病菌;通过形态特征结合rDNA-ITS序列分析将菌株GF3-3、GF3-6和GF6-1分别鉴定为Fusariumsolani、F.oxysporum和F.proliferatum。【结论】茄腐镰刀菌(F.solani)、尖孢镰刀菌(F. oxysporum)和层出镰刀菌(F. proliferatum)是乌头根腐病的主要病原菌,其中层出镰刀菌引起乌头患根腐病为首次报道。     

连作对附子根际土壤微生物群落结构的影响

目的对不同连作年限附子根际土壤微生物群落及其与土壤化学性质的变化规律进行探讨,以期为附子连作障碍的克服提供理论指导。方法对未种植附子(Y0)和种植1年(Y1)、2年附子(Y2)的土壤采样,应用Illumina MiSeq高通量测序技术和常规分析方法,分析土壤微生物群落和土壤化学性质变化规律。结果获得细菌和真菌总有效序列分别为110 218和32 819条,在属分类水平上,相较于Y0,Y2部分菌的相对丰度明显增加,如产酸细菌酸杆菌属(Acidobacteriaceae)增加396%,黄单胞菌属(Xanthomonas)增加250%,镰刀菌属(Fusarium)增加17.63%,木霉菌属(Trichoderma)增加7940%,而有益细菌假诺卡菌属(Pseudonocardia)仅为Y0的3.02%,硫杆菌属(Thiobacillus)消失。随着连作年限的增加,土壤中硝态氮、氨态氮、磷酸盐、S和K含量呈现为Y2Y1Y0,土壤pH值为Y0Y1Y2,Y2的附子产量仅为Y0的64.44%,部分土壤化学性质与附子根际土壤微生物种类显著相关。结论连作会使附子根际土壤微生物群落和土壤化学性质发生改变,根际土壤有益菌减少,致病菌增加可能是导致附子发病率增加,产量减少的原因。     

烟台补血草盐腺结构及发育过程观察

利用叶表皮离析、扫描电镜以及常规石蜡切片法对烟台补血草[ Limonium franchetii( Debx.) Kuntze]叶片盐腺的分布和结构特征及其发育过程进行了观察.结果表明:烟台补血草叶片上、下表皮均有盐腺分布,上、下表皮的盐腺密度分别为7.57和8.09 mm-2,同一时期叶片上表皮盐腺密度略小于下表皮.烟台补血草的成熟盐腺是由20个细胞构成的复合结构,其中,中央有4个分泌细胞,每个分泌细胞外侧均伴有1个长方形的毗邻细胞,再向外依次包围着4个内杯状细胞和4个外杯状细胞,靠近叶肉细胞处还有4个收集细胞,收集细胞与盐腺的其他细胞同源;在4个分泌细胞顶端的角质层中央各有1个小孔,称为泌盐孔.烟台补血草盐腺发育过程依次经历原表皮细胞期、2细胞期、4细胞期、8细胞期、16细胞期和20细胞期6个阶段,由1个单独的原表皮细胞发育而成,发育过程中细胞均进行垂周分裂;另外,同一时期的叶片存在盐腺发育不同步的现象.根据观察结果推测烟台补血草主要通过泌盐孔L向外泌盐.     

乌头须根总生物碱提取工艺的考察

目的:考察乌头须根中总生物碱的最佳提取工艺条件。方法:酸碱滴定法测定乌头须根中总生物碱含量,以总生物碱提取率为指标,采用L9(3)~4正交实验法筛选乌头须根总生物碱的最佳提取工艺。结果:乌头须根总生物碱含量为1.094%,影响提取的主次因素为:乙醇浓度>提取次数>提取时间>乙醇用量;优选得到的最佳提取工艺为A_3B_1C_3D_3,即以8倍量80%的乙醇提取3次,每次1.5小时。结论:乌头须根总生物碱含量较高,提取工艺条件稳定、经济、可行。