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Inducing animal viruses to adapt to chicken embryos or chicken embryo fibroblasts (CEF) is a common method to develop attenuated
live vaccines with full security. Canine distemper virus (CDV) also does this, but the mechanisms and particular receptors
remain unclear. Virus overlay protein blot assays were carried out on CEF membrane proteins, which were extracted respectively
with a Mem-PER™ kit, a radioimmunoprecipitation assay buffer or a modified co-immunoprecipitation method, and revealed a common
57 kDa positive band that differed from the 42-kDa positive band in Vero cells and also from those receptors reported in lymphocytes
and 293 cells, indicating a receptor diversity of CDV and the possibility of the 57-kDa protein acting as a receptor that
is involved in adaptive infection of CDV Kunming strain to CEF. 相似文献
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目的建立犬CDV抗体ELISA检测方法。方法培养vero细胞,接种CDV病毒,制备vero正常抗原和CDV特异抗原,滴定酶结合物和抗原最佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验。结果正常、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为1∶32 000、10μg/mL和1∶8 000;正常、特异抗原批内变异系数分别为9.1%和5.8%,批间平均变异系数分别为8.8%和6.6%;检测灵敏度为1∶2 560;与犬细小病毒(CPV)、犬肝炎病毒(ICHV)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强。可用于犬CDV抗体的检测。 相似文献
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犬瘟热病毒核蛋白基因重组腺病毒的构建、鉴定与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
核蛋白基因(N)位于犬瘟热病毒基因组的108-1679位置处,是保守性较强的免疫原性蛋白,因此选择N基因作为目的基因,利用酶切、连接等方法构建了含犬瘟热病毒核蛋白基因的穿梭质粒pVAXAE3LPN.以含CAV-2 SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建了重组质粒pCAV-2-CDVLPN,利用脂质体介导法转染MDCK细胞,转染三次后,细胞出现了典型的腺病毒样病变.电镜负染、切片观察,酶切、PCR.扩增及测序鉴定的结果表明表达犬瘟热核蛋白基因的重组犬2型腺病毒构建成功,表达的核蛋白分子量为58kDa. 相似文献
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目的利用环介导等温扩增(LAMP)技术建立一种检测犬瘟热病毒感染的新方法。方法根据GenBank中NP基因序列,设计4条LAMP特异性引物,对反应条件、特异性、可视化效果和应用效果进行研究。结果在60℃等温的条件下、1 h内可完成RT-LAMP扩增过程;特异性和可视效果良好;对63份临床标本进行检测,阳性检出率为71.4%(45/63),检出率高于RT-PCR的63.5%(40/63)。结论建立的RT-LAMP检测方法,显示了较高的特异性和敏感性,而且兼具高效、快捷、可视化的优势,为临床检测犬瘟热病毒感染提供了一种快速简便的新途径。 相似文献
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犬瘟热病毒细胞膜受体的鉴定 总被引:16,自引:0,他引:16
犬瘟热病毒(CDV)敏感细胞Vero用SDS或RIPA溶解缓冲液溶解,利用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA)鉴定犬瘟热病毒疫苗株(CDV-ondestepoort)的细胞受体。结果发现,在Vero细胞上有两组CDV结合蛋白质,即高分子量组蛋白质(127kD、120kD、110kD)与低分子量组蛋白质(27kD和30kD)。这些CDV结合蛋白组分的性质及在CDV致病中的作用有等进一步研究。 相似文献
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犬瘟热病毒N基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:为检测犬瘟热抗体提供诊断抗原,应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)N蛋白。方法:采用RT-PCR克隆CDV-N基因,构建重组杆粒BacmidCDV-N,并将其转染Sf9昆虫细胞。通过Western blot和间接免疫荧光检测N蛋白的表达。以表达的CDV N蛋白为包被抗原,建立了检测犬瘟热抗体的间接ELISA方法。结果:成功表达了CDV N蛋白。间接ELISA(iELISA)方法中,犬血清最佳稀释度1∶80,N蛋白稀释度1∶40(6.3μg/100μl)。应用该方法共检测了36份犬血清,与中和试验检测方法相比较,其特异性为81.8%,灵敏度为96.0%,符合率为91.7%。结论:表达的CDV-N蛋白具有良好反应原性,建立了快速检测CDV阳性血清的iELISA方法。 相似文献
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Matrix metalloproteinases and their endogenous inhibitors in neuronal physiology of the adult brain 总被引:25,自引:0,他引:25
More than 20 matrix metalloproteinases (MMPs) and four of their endogenous tissue inhibitors (TIMPs) act together to control tightly temporally restricted, focal proteolysis of extracellular matrix. In the neurons of the adult brain several components of the TIMP/MMP system are expressed and are responsive to changes in neuronal activity. Furthermore, functional studies, especially involving blocking of MMP activities, along with the identification of MMP substrates in the brain strongly suggest that this enzymatic system plays an important physiological role in adult brain neurons, possibly being pivotal for neuronal plasticity. 相似文献
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犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)感染引起的一种急性、高度接触性、致死性传染病.CDV属副粘病毒科麻疹病毒属成员,宿主谱很广,可感染犬(Canis familiaris)、狐狸(Vulpes vulpes)、貉(Ussuriensis)、狼(Canis lupus)、雪貂(Lepus zibellina)、虎(Panthera tigris)、狮(Panthera leo)、大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)、小熊猫(Ailures fulgens)、黑熊(Selenarctas thibetanus)等动物,严重危害养犬业、经济动物养殖业的健康发展以及野生动物的生存. 相似文献