广西巴马小型猪血清淀粉样P物质基因真核载体构建及细胞转染

血清淀粉样P物质(Serum Amyloid Pcomponent,SAP)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用.以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增出相应cDNA片段,连接到克隆载体pMD18-T上进行检测,测序结果为675 bp,与GenBank所提供相关序列同源性为100％,并成功构建pEGFP-N1 -SAP重组真核表达载体,利用脂质体(Lipofectamine 2000)介导法将重组质粒导入到NIH-3T3细胞中培养,经转染24 h后,置于倒置荧光显微镜下观察,发现含有重组质粒的NIH-3T3细胞中表达出绿色荧光,为进一步研究SAP基因的功能特点及在试验动物相关疾病模型的应用提供务件.     

西双版纳小耳猪DNA指纹分析

采用ECL核酸直接标记和检测试剂盒,以HRP标记JL-02多位点探针,对云南版纳小耳猪的HinfI或HaeⅢ酶切图谱进行Southern杂交,以化学发光法进行检测,获得了清晰可辨的、具有高度多态性的DNA指纹图谱.大于2kb的谱带数在13～17条之间,JB亚系内805、807家系和JS亚系内111、121、133、151家系不同个体间的相似系数分别为0.92±0.04、0.85±0.13、0.86±0.02、0.80±0.05、0.84±0.09、0.88士0.08,显著高于家系间的相似系数.JB亚系内的805家系和JS亚系内的151家系不同个体间的相似系数最大,分别为0.92和0.88,说明其近交程度较高,个体间差异较小,均一性较强.另外,JB亚系内的805与807两个家系不同个体猪在11.5kb处,均有一条区别于其他家系的特有图带,其是否是导致JB亚系体型较大的特异性基因座,有待进一步研究。 Abstract:Clearly and highly polymorphic DNA fingerprints from Banna miniature pig were obtained by Southern hybridization with a nonisotopieally HRP(Horseradish peroxidase)labelled multiloci minisatellite probe JL-02,the fragment number of which were ranged from 13 to 17.The similarity coefficient of various individuals from family “805”,“807” in substrain JB and family “111”,“121”,“133”,“151” in substrain JS was 0.92 + 0.04,0.85 + 0.13,0.86 +- 0.02,0.80 +0.05,0.84 + 0.09,0.88 + 0.08,which is higher than that bet ween families(0.46~0.65).Furtherly,similarity coefficients of family “805” in substrain JB and family “151” in substrain JS were 0.92 and 0.88 respectively.This showed that the two families have the higher inbreeding degree,smaller genetic difference,among individuals and the better homogeneity.In addition,all individuals from family 805,807 in substrain JB have a unique fragment different from other individuals from other families,which is abount 11.5kb long.This suggested that this may be the gene resulted in large bodyweight of substrain JB,further research is necessary to be conducted.     

广西巴马小型猪克隆胚的构建及胚胎移植

通过胚胎移植验证构建的广西巴马小型猪克隆胚是否可以发育到期.利用刺入式手术胚胎移植法,将0.5～1.5日龄巴马小型猪克隆胚移植到2头巴马小型猪和2头陆川猪的输卵管壶腹部.其中2头巴马小型猪和1头陆川猪返情,另外一头陆川猪于2007年10月13日产下1头克隆雄性巴马小型猪.说明巴马小型猪克隆胚能够在受体猪体内发育到期并产仔.     

The secretory ameloblast of the mini-pig foetus

Electron microscopic investigations of secretory ameloblasts from deciduous tooth germs of mini-pig foetuses and investigations of the ability of various fixatives to preserve these cells in tooth germs immersion-fixed in toto 5 min, 10 min, 15 min, 20 min and 40 min after death of the mother gave the following results:

版纳微型猪近交系TDRP1基因克隆、鉴定及mRNA的组织表达特性

目的克隆版纳微型猪近交系（BMI）不育和可育公猪TDRP1基因,分析其序列及mRNA表达水平上的差异,预测其蛋白质功能,并检测该基因在可育公猪中的组织表达分布情况。方法以猪NM_001198925序列为模板,设计特异引物,采用RT-PCR方法结合测序获得TDRP1的c DNA序列并进行生物信息学分析;采用半定量PCR方法检测TDRP1在不育和可育公猪睾丸中的表达规律,分析该基因在可育公猪17种组织中的表达特征。结果获得了BMI TDRP1基因的编码区序列（Gen Bank登录号：KJ186786）,生物信息学分析表明其编码186个氨基酸,蛋白质相对分子质量（Mw）为20.49×10^3,等电点（p I）为5.86,无信号肽,有94.1%的概率位于细胞核,含有1个亮氨酸富集的核输出信号。不同物种的氨基酸序列比对表明猪TDRP1与人、恒河猴、小鼠和大鼠等哺乳动物的TDRP1相似性在73%-83.2%之间,其中与人、恒河猴的相似性较高。mRNA表达分析表明,TDRP1在BMI不育和可育公猪睾丸间表达水平差异无显著,在精囊腺和前列腺中高表达,在睾丸和小脑中中度表达,在大脑和肾脏中低表达,在其余组织中不表达。结论成功克隆了BMI TDRP1基因的全长编码区序列并发现了BMI特有的2个SNP位点;TDRP1基因在BMI不育和可育公猪间序列完全一致,睾丸mRNA表达水平差异无显著性,多组织转录谱分析表明该基因存在明显的组织差异表达现象,在精囊腺和前列腺中有较高表达量,为深入研究TDRP1基因在精子发生方面的作用奠定了基础。     

五指山小型猪两种股动脉穿刺方法的比较

目的比较五指山小型猪在急性心肌梗死造模前行股动脉穿刺所使用的两种方法的成功率和并发症发生率以及所花费时间,为动物实验时行股动脉穿刺提供依据。方法拟行股动脉穿刺的五指山小型猪16头随机分为两组即切开直视穿刺组（n：8）和超声引导穿刺组（n=8）,比较两组穿刺的成功率、并发症发生率以及穿刺所花费时间。结果切开直视穿刺组的成功率及感染发生率均无差异,但出血发生率前者显著低于后者（P〈0．05）,且花费时间也明显少于后者（P〈0．05）。结论切开直视股动脉穿刺术是一种成功率高,安全性好,花费时间相对较少的方法。     

版纳微型猪近交系133家系SLA-DQ cDNA的克隆和序列分析

目的阐明版纳微型猪近交系133家系(BMI-133)免疫相关基因及其可能在猪-人异种器官移植中的作用。方法提取外周血总RNA,通过反转录、cDNA合成及转化,最终获得了具有完整阅读框架的SLA-DQA和SLA-DQBcDNA克隆。结果序列分析表明,所获得的DQAcDNA长度为830bp,编码255个氨基酸残基;DQBcDNA长度为1103bp,编码262个氨基酸残基。结论和其他已报道的小型猪比较,本研究克隆的序列无论在核苷酸还是氨基酸水平上都与之存在差异,由此确定这是BMI-133的两个特有的新等位基因。另外,通过与人的相应序列对比发现,BMI-133与人类相应基因相比具有较高的同源性。随着研究的深入,BMI-133家系极有可能成为供异种器官移植的专用近交系猪群。     

版纳小型猪近交系椎骨、肋骨的形态及生物力学研究

本研究观察了版纳小型猪近交系椎骨、肋骨的解剖学、组织学形态,并对其腰椎进行轴向载荷压缩试验。小型猪椎骨及肋骨在解剖学、组织学方面与人近似,其腰椎能承受人类正常生理载荷。因此,版纳小型猪椎骨、肋骨可以作为异种骨移植的材料。     

多囊肾病小型猪肾脏组织中增殖和凋亡的改变

目的:观察ADPKD小型猪肾脏组织中细胞增殖和凋亡的改变。方法:使用PKD1基因敲除的小型猪模型,用Western blot和免疫组化方法检测肾脏组织中细胞增殖指标PCNA;增殖相关的mTOR信号通路分子(phospho-mTOR、phospho-p70S6、phospho-4EBP1)和ERK信号通路分子(phospho-PKA、phospho-MEK、phospho-ERK)的表达水平以及内皮细胞粘附分子CD31以及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3的表达变化。结果:在ADPKD小型猪肾脏组织中,增殖指标PCNA表达显著升高。mTOR信号通路分子phospho-mTOR、phospho-p70S6、phospho-4EBP1水平明显升高,ERK信号通路分子中phospho-PKA、phospho-MEK、phospho-ERK水平明显升高。CD31表达明显升高,Bax/Bcl-2的比值以及caspase 3的表达水平显著升高。结论:本研究显示在ADPKD小型猪肾脏组织中,细胞增殖和凋亡信号通路明显激活。